前列腺癌诊断新突破：基于CLDN5等8个基因高甲基化CpG位点的表观遗传标记物研究

为解决前列腺癌(PCa)筛查中PSA检测特异性不足的问题，研究人员通过EM-Seq和MS-PCR技术，鉴定出CLDN5、GSTP1等8个基因的66个高甲基化CpG位点，可作为高准确性表观遗传标记物。该研究为无创诊断提供新策略，发表于《Clinical Epigenetics》。

　　

前列腺癌是全球男性癌症死亡的首要原因，但现有筛查手段前列腺特异性抗原(PSA)检测存在特异性低、易导致过度诊疗的缺陷。尽管多参数磁共振成像(mp-MRI)等技术有所进展，其高昂成本和操作复杂性限制了临床应用。因此，开发基于液体活检的高效表观遗传诊断工具成为迫切需求。

巴黎大脑研究所(ICM)的Jean-Pierre Roperch团队在《Clinical Epigenetics》发表研究，通过创新性表观基因组分析技术，揭示了8个基因的高甲基化特征可作为前列腺癌诊断的新型分子标记。研究人员采用酶促甲基化测序(EM-Seq)对15对癌/癌旁组织进行全基因组甲基化分析，发现超过400万个差异甲基化CpG位点。通过甲基化特异性PCR(MS-PCR)验证，最终锁定CLDN5、GSTP1、NBEAL2、PRICKLE2、SALL3、TAMALIN/GRASP、TJP2和TMEM106A基因的66个高甲基化位点，其区分癌与非癌组织的曲线下面积(AUC)达0.987-1.0。

关键技术包括：1) 对30例根治性前列腺切除术样本进行EM-Seq全甲基组测序；2) 设计包含ALBUMIN内参的MS-PCR多重检测体系；3) 利用Affymetrix芯片和Visium 10X空间转录组分析68例非肿瘤与101例不同侵袭性肿瘤样本的基因表达关联性。

研究结果

EM-seq甲基化分析

肿瘤组织呈现显著甲基化模式改变：20-80%甲基化CpG比例增加5.6倍(p=5.6e-5)，且主成分分析显示甲基化差异主要源于癌变状态。

MS-PCR检测体系开发

设计的引物/探针覆盖66个关键CpG位点，所有靶基因在癌组织的甲基化水平显著升高（如GSTP1从5.0%升至103.4%，p=2.3e-8），EM-Seq与MS-PCR结果高度相关（Pearson r=0.93）。

RNA表达验证

除NBEAL2和TJP2外，其余6个基因在肿瘤组织中表达显著下调（p≤0.0001）。空间转录组显示，高侵袭性癌腺体（Gleason 4级）中8个基因表达均低于良性腺体（p<0.0001）。

结论与意义

该研究首次系统鉴定PRICKLE2和NBEAL2在前列腺癌中的甲基化特征，证实SALL3表达与肿瘤侵袭性负相关。相比传统PSA检测，这些表观遗传标记具有更高特异性，且MS-PCR技术易于临床转化。未来在更大队列和液体活检中的验证，可能推动前列腺癌筛查进入表观遗传学新时代。