细胞培养中支原体污染检测的新型快速qPCR工作流程开发及应用

针对细胞培养中支原体(Mycoplasma spp.)传统检测方法耗时长、灵敏度低的问题，研究人员开发了整合99°C?1 min热裂解与SYBR Green qPCR的快速检测方案。该工作流程通过设计靶向16S rDNA 86-bp的高覆盖引物，可灵敏检出64个细菌细胞，性能媲美酚氯仿提取法，为实验室提供了一种高效经济的支原体监控手段。

　　

支原体(Mycoplasma)污染堪称细胞培养实验室的"隐形杀手"，常规检测方法往往需要与繁琐的操作和低灵敏度"斗智斗勇"。这项研究带来了一场技术革新——将99°C高温裂解1分钟的"快准狠"DNA提取法，与SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)检测强强联合。科研团队从GeneBank中精选109种支原体序列，针对16S核糖体DNA(rDNA)上86个碱基对(bp)的保守区域，设计出能"一网打尽"常见污染菌株（如精氨酸支原体M. arginini、人型支原体M. hominis等）的引物。经过优化，这套方案的检测灵敏度达到64个细菌细胞的水平，与传统酚氯仿提取+qPCR的组合相比毫不逊色。在实际应用中，该技术成功"揪出"了已知污染样本中的支原体，展现出"火眼金睛"般的检测能力。这项研究为细胞培养质量控制提供了一把操作简单、成本低廉且灵敏度高的"利器"。