利用报告基因法建立促黄体激素生物学活性测定方法

　　

摘要: 本研究根据促黄体激素(luteinizing hormone,LH)与受体结合后激活cAMP信号通路,构建了LHCGR (-Ex10)-CRE-luc-HEK293细胞系,并用实验室已建立的LHCGR-CRE-luc-HEK293细胞系,分别建立了检测LH生物活性的报告基因法。对该方法条件进行优化,对方法的专属性、相对准确度、精密度和线性进行验证。结果显示,LH浓度与报告基因表达量存在量效关系,且符合四参数曲线。经优化后,条件确定为LH起始浓度为200 nmol·mL^-1,6倍连续稀释,10个浓度,细胞数为每孔30 000个,孵育时间为6 h。经证实该方法专属性强,准确度、精密度、线性良好。本研究成功建立并验证了检测LH生物学活性的报告基因法,可以用于LH生物活性检测和质量控制。