ANGPTL4通过整合素/p-Syk信号通路诱导线粒体自噬加重血管性痴呆认知障碍的机制研究

本研究聚焦血管性痴呆（VaD）的致病机制，首次揭示分泌蛋白ANGPTL4通过激活整合素/p-Syk/p-JNK信号通路，诱导线粒体自噬（mitophagy）关键蛋白BNIP3、PINK1/Parkin表达，导致海马CA1区神经元线粒体应激和凋亡，从而加重认知功能障碍。通过2VO大鼠模型和体外低氧低糖细胞模型，结合Syk抑制剂（R788）和JNK抑制剂（SP600125）干预，证实靶向ANGPTL4-Syk-JNK轴可显著改善线粒体功能与记忆损伤，为VaD治疗提供新靶点。

　　

论文解读

研究背景与意义

血管性痴呆（VaD）作为第二大常见痴呆类型，全球患者超5500万，其典型病理特征是脑血管病变引发的进行性认知功能下降。尽管线粒体功能障碍被证实参与VaD进程，但调控线粒体自噬（mitophagy）与细胞凋亡的关键分子机制尚不明确。近年研究发现，血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）在神经炎症和血脑屏障调控中发挥重要作用，但其在VaD中的角色仍是空白。武汉市东西湖区人民医院老年医学科团队针对这一科学问题展开研究，首次揭示ANGPTL4通过整合素/p-Syk通路诱导线粒体自噬级联反应，加重海马神经元损伤的完整机制，论文发表于《Scientific Reports》。

关键技术方法

研究采用双侧颈动脉结扎（2-VO）大鼠模型模拟VaD病理，通过立体定位注射慢病毒实现海马区ANGPTL4基因过表达（OE）或敲低（KD）。认知功能通过Morris水迷宫（MWM）评估；海马CA1区神经元形态采用苏木精-伊红（HE）染色观察；关键蛋白（ANGPTL4、p-Syk、BNIP3等）表达通过免疫组化（IHC）和Western blot（WB）检测；体外实验以低氧（1% O₂）、低血清（1% FBS）、低糖（1 g/L）刺激HT22海马细胞，并联合Syk抑制剂（R788）或JNK抑制剂（SP600125）干预；线粒体膜电位（ΔΨ_m）采用JC-1荧光探针检测。

研究结果与发现

1. 生物信息学分析揭示ANGPTL4/SYK/JNK通路关联

GSE122063数据集分析显示，VaD患者额叶与颞叶皮层中ANGPTL4、SYK、JNK(MAPK8)均显著上调（图1A-B）。相关性分析证实ANGPTL4与SYK/JNK表达正相关（r>0.6, P<0.001），且SYK-JNK-BNIP3形成级联调控轴（图1F-J），提示该通路参与VaD病理。

2. ANGPTL4加重VaD认知功能障碍

MWM实验表明，ANGPTL4过表达使2VO大鼠平台穿越次数减少48%（F=44.80, P<0.0001），逃避潜伏期延长；而ANGPTL4敲低组穿越次数增加35%（F=21.64, P<0.0001），认知功能接近假手术组（图2B-C）。

3. ANGPTL4通过p-Syk加剧海马损伤

HE染色显示ANGPTL4过表达组海马CA1区神经元数量减少40%，结构紊乱（图3A）；IHC证实其p-Syk表达较VaD组再升高2.3倍（t=11.91, P<0.0001），而敲低组p-Syk降低65%（t=10.24, P<0.0001）（图3B）。

4. ANGPTL4激活Syk/JNK通路诱导线粒体自噬

WB检测发现ANGPTL4过表达使p-Syk、p-JNK和线粒体自噬蛋白BNIP3表达分别上调2.8倍（t=10.17）、2.5倍（t=7.238）和3.1倍（t=7.830）（均P<0.0001）（图4）。体外实验进一步证实：ANGPTL4过表达使整合素、p-Syk、p-JNK升高1.8-2.4倍（P<0.01），而Syk抑制剂（R788）可阻断p-Syk/p-JNK激活（t>8.12, P<0.01）（图5A）。

5. Syk/JNK抑制剂挽救线粒体功能与细胞凋亡

JC-1检测显示ANGPTL4过表达使线粒体膜电位（红/绿荧光比）下降52%（t=6.10, P<0.01），提示线粒体损伤（图6A）。WB证实其诱导线粒体自噬蛋白PINK1、Parkin及凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达升高1.7-2.5倍（P<0.01）。而Syk抑制剂使BNIP3/PINK1/Parkin降低60%-75%（t>8.25, P<0.0