帕博利珠单抗通过促进CDK6蛋白降解抑制卵巢癌细胞恶性进展的机制研究

本研究针对卵巢癌(OC)治疗中铂类耐药和PD-1抑制剂直接抗肿瘤机制不明的关键问题，沈阳医学院病原生物学系吴轶团队发现帕博利珠单抗(Pembrolizumab)可通过泛素-蛋白酶体途径促进CDK6蛋白降解，诱导G0/G1期阻滞，抑制EMT进程，并增强顺铂敏感性。该研究为PD-1抑制剂在OC中的直接抗肿瘤作用提供了新机制，发表于《Scientific Reports》。

　　

卵巢癌作为妇科常见恶性肿瘤，因其发病隐匿、进展迅速的特点，超过半数患者确诊时已属晚期。尽管以顺铂(Cisplatin)为基础的化疗方案是标准治疗手段，但约75%患者最终会产生耐药性，导致治疗失败。与此同时，PD-1抑制剂帕博利珠单抗虽在多种癌症免疫治疗中表现突出，但其对肿瘤细胞的直接作用机制仍属未知。这一现状促使沈阳医学院病原生物学系的研究团队对帕博利珠单抗在卵巢癌中的直接抗肿瘤效应展开深入研究。

研究团队采用CCK-8法、克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell迁移实验评估细胞活力和迁移能力，通过流式细胞术分析细胞周期分布，结合蛋白质印迹(Western blot)和免疫共沉淀(Co-IP)技术探究CDK6蛋白稳定性变化机制。所有实验均在HO-8910和CAOV-3两种卵巢癌细胞系中进行。

在"Pembrolizumab inhibits OC cell growth and proliferation"部分，研究显示帕博利珠单抗以剂量和时间依赖性方式显著抑制卵巢癌细胞增殖，HO-8910和CAOV-3细胞的IC₅₀分别为21.07 μg/mL和15.52 μg/mL。长期培养实验中，10 μg/mL剂量可使HO-8901细胞集落形成减少90.5%。

"Pembrolizumab treatment causes G0/G1 arrest in ovarian cancer cells"部分揭示药物处理48小时后，HO-8910细胞G1期比例从58.58%升至64.63%，S期比例从34.9%降至26.84%，表明其通过阻滞G1-S期转换抑制细胞增殖。

机制研究部分"Pembrolizumab promotes CDK6 ubiquitination and its subsequent degradation in HO-8910 cells"取得突破性发现：帕博利珠单抗特异性促进CDK6蛋白（而非CDK4或CCND1）通过泛素-蛋白酶体途径降解，使CDK6半衰期从超过24小时缩短至6小时以内。免疫共沉淀证实药物处理显著增强CDK6多聚泛素化修饰。

在迁移能力方面，"Pembrolizumab suppresses migratory capacity of ovarian cancer cells"显示药物处理使划痕愈合率显著降低，Transwell迁移细胞数减少。Western blot分析揭示这与其下调Snail、N-cadherin和Vimentin，上调E-cadherin，抑制上皮-间质转化(EMT)进程密切相关。

临床应用价值体现在"Pembrolizumab enhances effect of cisplatin on suppressing cancer cell proliferation"部分：帕博利珠单抗与顺铂联用使HO-8910细胞IC₅₀降至9.643 μg/mL，显著增强顺铂的抗增殖效果。

这项发表于《Scientific Reports》的研究首次阐明帕博利珠单抗通过促进CDK6泛素化降解直接抑制卵巢癌细胞的新机制，不仅拓展了对PD-1抑制剂作用机制的认识，还为克服顺铂耐药提供了新策略。特别是发现CDK6作为"可成药"靶点，其降解比激酶抑制可能更具治疗优势，为开发靶向蛋白降解疗法提供了重要理论依据。研究团队建议未来应深入探索帕博利珠单抗诱导CDK6泛素化的具体E3连接酶机制，并开展相关动物实验验证其体内疗效。