印度黑热病临床分离株多位点序列分型揭示种内遗传多样性及其流行病学意义

本研究针对印度黑热病病原体利什曼原虫（Leishmania sp.）的遗传多样性问题，采用多位点序列分型（MLST）技术对15例临床分离株（含12例KA和3例para-KDL）进行系统分析。研究发现印度L. donovani种群存在显著种内遗传变异，首次报道spermidine synthase（spdsyn）基因的保守性特征，并鉴定出区分L. tropica与L. donovani的特异性序列型ST3，为流行病学监测提供分子标记。

　　

在印度次大陆，黑热病（Kala-azar, KA）这个由利什曼原虫（Leishmania sp.）引起的致命性疾病，曾被认为已根除却又卷土重来。更令人担忧的是，随着锑剂耐药株的出现和跨境人口流动，这种被忽视的热带病正在形成新的流行病学威胁。传统观点认为印度KA主要由L. donovani引起，但近年研究发现L. tropica也能导致该病，且寄生虫种群存在令人不安的遗传变异——这可能是治疗失败和疾病持续流行的关键因素。面对这一严峻形势，来自印度加尔各答国家医学院（Calcutta National Medical College）的研究团队开展了一项开创性研究，他们采用多位点序列分型（MLST）技术对印度KA和皮肤利什曼病（para-KDL）临床分离株进行系统分析，揭示了此前未知的遗传多样性特征，相关成果发表在《Acta Tropica》上。

研究人员运用MLST技术对15个临床分离株（12例KA和3例para-KDL）的15个看家基因进行扩增测序，包括aconitase（aco）、alanine aminotransferase（alat）等关键基因。通过NCBI-BLAST获取参考菌株序列，采用三种分析方案进行种间和种内比较，使用DnaSP软件计算遗传多样性参数，并构建基于6个串联基因座的系统发育树。

【Ethics statements】研究获得伦理委员会批准，所有样本均取得患者知情同意。
【The reference strains and clinical isolates】15个临床分离株中，前期研究已通过ITS1-RFLP鉴定1株为L. tropica，14株为L. donovani，其中T5分离株表现出特殊遗传特征。
【Fifteen candidate loci amplification】首次报道印度分离株在spdsyn基因上完全保守，而alat基因的ST3序列型可作为区分L. tropica与L. donovani的分子标记。
【Discussion】研究发现印度L. donovani种群存在显著种内变异，推翻了既往"遗传同质"的认知。系统发育分析显示单系和并系分支共存，spdsyn基因的保守性提示其可能成为药物开发新靶点。

这项研究具有三重重要意义：首先，MLST技术比传统MLEE方法更能揭示细微遗传差异，为流行病学追踪提供高分辨率工具；其次，发现spdsyn基因在印度L. donovani种群中的保守性，为抗利什曼病药物研发指明新方向；最重要的是，研究证实遗传变异与药物压力存在关联，为解释治疗失败和疾病复发提供了分子基础。正如通讯作者Madhumita Manna强调的，这些发现将直接影响印度次大陆黑热病的防控策略制定，对实现WHO 2030消除计划具有重要指导价值。