微滴数字酶循环技术在单分子均相免疫检测中的革新应用

为解决传统液滴单分子均相免疫检测(SiMHoI)依赖聚合酶链反应(PCR)、仪器要求高、背景干扰强等问题，研究人员开发了基于酶循环反应(ER)的等温信号放大策略。该技术通过抗体/适配体标记核酸探针捕获微滴内单分子靶标，结合分子信标实现20分钟内选择性荧光信号放大，检测限低至10?18 M，阳性/阴性比提升20倍，临床验证与流式细胞术高度一致(P > 0.05)，为超低丰度生物标志物检测提供新方案。

　　

将微滴微流控与单分子均相免疫检测(SiMHoI)相结合，这项研究开创性地采用酶循环反应(ER)替代传统PCR扩增。当抗体或适配体标记的核酸探针在微滴中捕获到单个靶标分子后，分子信标会触发级联酶促反应，就像微型"信号放大器"般实现等温条件下的荧光信号倍增。这种设计巧妙避开了热循环步骤，20分钟内即可完成检测，其自噪声抑制机制使信噪比较常规体相反应提升近20倍，灵敏度直达10^?18 M量级——相当于在奥林匹克标准泳池中精准定位一个特定分子。临床测试显示，该方法与金标准流式细胞术的检测结果无统计学差异(P > 0.05)，为超早期疾病诊断提供了犹如"分子显微镜"般的检测利器。