circAGFG1/miR-195-5p/PD-L1轴激活在脓毒症肺损伤中的作用机制及治疗潜力

本研究针对脓毒症诱发急性肺损伤（ALI）的治疗困境，揭示了非编码RNA调控的免疫逃逸新机制。研究人员通过临床样本分析、细胞共培养和小鼠模型实验，首次证实circAGFG1通过吸附miR-195-5p上调PD-L1表达，从而抑制Th17细胞分化并减轻肺泡上皮损伤。该发现为开发靶向RNA通路的ALI治疗策略提供了理论依据。

　　

脓毒症引发的急性肺损伤（ALI）一直是重症医学领域的治疗难题，死亡率高达40%。尽管现有支持治疗手段不断改进，但针对肺上皮细胞损伤和过度炎症反应的特异性干预仍显不足。近年来，非编码RNA在免疫调控中的作用备受关注，但circRNA如何通过竞争性内源RNA（ceRNA）机制参与脓毒症相关ALI尚不清楚。

山东第一医科大学的研究团队在《Human Cell》发表的研究中，创新性地揭示了circAGFG1/miR-195-5p/PD-L1轴在ALI中的核心作用。研究采用多组学技术结合功能验证，首先通过临床队列发现脓毒症患者外周血中circAGFG1显著下调而miR-195-5p上调；随后利用Calu-3细胞系和脐带血来源的Th17细胞共培养体系，结合cecal ligation and puncture（CLP）小鼠模型，系统解析了该轴的分子机制。

主要技术方法

研究整合临床样本（30例脓毒症/ALI患者外周血）与动物模型（CLP诱导的脓毒症小鼠），采用双荧光素酶报告基因验证RNA互作，通过qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测分子表达，结合CCK-8和TUNEL分析细胞活力与凋亡，并运用ELISA定量炎症因子水平。

circAGFG1/miR-195-5p/PD-L1轴的临床相关性

临床数据分析显示，脓毒症合并ALI患者circAGFG1表达较健康对照降低2倍以上，而miR-195-5p升高3.5倍（图1）。这种负相关性提示二者可能形成调控网络，且与疾病严重程度（APACHE II评分）显著相关。

分子机制解析

双荧光素酶实验证实miR-195-5p可直接结合circAGFG1和PD-L1的3'UTR（补充图S1）。在LPS刺激的Calu-3细胞中，过表达circAGFG1使PD-L1蛋白水平增加2.3倍，同时降低miR-195-5p活性（图2）。值得注意的是，该调控具有时空特异性——circAGFG1过表达仅在前24小时显著提升细胞活力（图3A），暗示其可能参与早期损伤修复。

上皮屏障保护作用

Western blot显示PD-L1上调可使occludin和E-cadherin表达恢复至正常水平80%以上（图4）。免疫荧光证实circAGFG1过表达能维持肺泡上皮紧密连接结构（图10C），而PD-L1敲除小鼠则出现典型屏障破坏（图11）。

免疫调控功能

Th17细胞共培养实验表明，circAGFG1过表达使IL-17⁺细胞比例从28%降至9%（图5B），且上清液中IL-6和TNF-α水平降低60%（图5C）。流式检测显示CLP小鼠肺组织PD-L1⁺上皮细胞比例与Th17浸润呈负相关（图8-9）。

讨论与意义

该研究首次阐明circAGFG1通过"分子海绵"作用解除miR-195-5p对PD-L1的抑制，形成三重调控网络：①维持肺泡上皮完整性；②抑制过度炎症反应；③调控Th17/调节性T细胞平衡。这一发现为理解脓毒症肺损伤的异质性提供了新视角——PD-L1表达水平可能成为预测ALI预后的生物标志物，而circAGFG1模拟物或miR-195-5p抑制剂有望发展为靶向治疗药物。

研究也存在若干局限：Calu-3细胞系作为肿瘤来源模型可能影响结果普适性；circAGFG1是否调控其他miRNA尚待验证。未来研究可探索：①临床大样本验证该轴的诊断价值；②开发纳米载体递送circAGFG1至肺组织；③联合PD-1/PD-L1抑制剂优化治疗方案。这项由Yang Bi和Rui Ding共同完成的工作，为脓毒症相关ALI的精准治疗开辟了新途径。