分子诊断联合熔解曲线分析揭示FilmArray胃肠道检测面板中弯曲杆菌假阳性问题

【编辑推荐】美国威斯康星州卫生实验室通过大样本监测（2018-2024年）发现，BioFire FilmArray胃肠道面板（FilmArray GI）检测弯曲杆菌（Campylobacter）的阳性率较其他培养非依赖性诊断技术（CIDT）高1.56倍，但培养确认率显著降低（62% vs 78%），熔解曲线分析揭示61%培养阴性样本存在非典型峰型，提示该平台可能存在弯曲杆菌假阳性问题，对临床诊疗和公共卫生监测具有重要警示意义。

　　

ABSTRACT

肠道病原体监测对暴发识别和防控至关重要。BioFire FilmArray胃肠道面板（FilmArray GI）作为威斯康星州最常用的培养非依赖性诊断测试（CIDT），近期被临床实验室质疑其弯曲杆菌检测准确性。威斯康星州卫生实验室（WSLH）通过2018-2024年数据分析发现，FilmArray GI检测的弯曲杆菌阳性率较其他CIDT平台平均升高1.56倍，但培养确认率显著降低（62% vs 78%）。进一步熔解曲线分析显示，61%培养阴性样本呈现非典型峰型，提示存在平台特异性假阳性问题。

INTRODUCTION

弯曲杆菌是美国年导致150万例感染的重要肠道病原体。随着CIDT技术的普及，FilmArray GI因操作便捷成为主流检测平台，但该平台曾于2019年和2024年因隐孢子虫和诺如病毒假阳性问题被FDA召回。2023年威斯康星州两家临床实验室发现，改用FilmArray GI后弯曲杆菌培养确认率从87%骤降至54%，促使本研究开展多维度验证。

MATERIALS AND METHODS

研究分析325,515例威斯康星临床实验室网络（WCLN）监测数据。通过以下四方面验证：

1. 阳性率分析：比较FilmArray GI与其他CIDT（BD Max/Verigene/xTAG）的季度/年度阳性率

2. 培养确认：对7家高提交量实验室的4,460份标本进行传统培养（CVA/BAP培养基+42°C微需氧环境）

3. 运输时间影响：评估2023年694份标本1-7天运输对弯曲杆菌存活的影响

4. 熔解曲线验证：分析65例阳性标本的熔解曲线特征（含36例培养阴性样本）

RESULTS

1. 阳性率异常升高

   FilmArray GI检测弯曲杆菌阳性率持续高于其他平台，2023年达峰值（图1）。沙门氏菌和STEC未见显著差异。

2. 培养确认率下降

   FilmArray GI阳性样本的培养确认率较其他CIDT低16个百分点（P<0.05）。值得注意的是，某实验室更换平台后确认率从87%暴跌至54%（图2）。运输时间分析排除标本降解干扰，确认率差异与运输天数无关（图3）。

3. 熔解曲线特征

   培养阳性样本呈现三种典型曲线：

   • 空肠弯曲杆菌（C. jejuni）：双峰型（82°C主峰）

   • 瑞士/乌普萨拉弯曲杆菌（C. helveticus/upsaliensis）：宽幅单峰

   • 大肠弯曲杆菌（C. coli）：78°C锐峰

而61%（22/36）培养阴性样本呈现独特异常曲线：

• 主要类型（20/36）：80-81°C高尖峰伴左向拖尾（Campy 2靶标）

• 次要类型（2/36）：多峰异常波形（图4）

DISCUSSION

本研究首次通过多维度证据链揭示FilmArray GI可能存在弯曲杆菌假阳性问题：

1. 技术层面：Campy 2靶标非特异性扩增产生特征性"高尖左拖尾"熔解曲线

2. 临床影响：可能导致不必要的抗生素使用（如红霉素）和公共卫生数据失真

3. 改进建议：临床实验室应结合培养验证，厂商需优化探针特异性

研究局限性包括熔解曲线样本量较小（尤其C. coli仅3例），且未进行第三方分子验证。但运输实验排除了标本降解假说，异常熔解曲线模式为假阳性判断提供了直接证据。该发现再次凸显公共卫生监测对商业诊断试剂质量管控的重要作用。

ACKNOWLEDGMENTS

特别感谢参与WCLN监测的临床实验室，以及提供熔解曲线原始数据的合作机构。本研究结论不代表CDC官方立场。