妊娠后期母猪接种减毒非洲猪瘟疫苗ASFV-G-ΔI177L/ΔLVR的安全性及免疫原性评估

这篇研究首次评估了减毒非洲猪瘟疫苗株ASFV-G-ΔI177L/ΔLVR在妊娠后期母猪中的安全性与免疫原性。实验证实该疫苗（LAV）在103.5 TCID50剂量下未引起流产或临床异常，且能通过胎盘和初乳将抗体（P72基因）垂直传播给仔猪，为高风险群体免疫提供了关键数据。

　　

摘要

非洲猪瘟（ASF）作为致死率高达100%的烈性传染病，其疫苗研发是全球焦点。越南于2023年率先批准两种本土ASF疫苗上市。本研究基于USDA开发的减毒株ASFV-G-ΔI177L/ΔLVR（P19代次），首次在妊娠90-95天的母猪中验证其安全性。结果显示，接种组母猪体温正常、分娩顺利，仔猪通过初乳获得抗体且未出现病理损伤，证实了该疫苗在特殊生理阶段的适用性。

1. 引言

ASFV复杂的25种基因型及高变异性使疫苗研发困难。当前主流策略是通过基因缺失（如I177L和LVR区）构建减毒活疫苗（LAV）。ASFV-G-ΔI177L虽在越南获批，但其依赖原代巨噬细胞培养的局限性促使改良株ASFV-G-ΔI177L/ΔLVR诞生——该株能在稳定猪上皮细胞系（PIPEC）中高效复制。本研究聚焦妊娠母猪这一高风险群体，评估疫苗垂直传播风险与免疫保护潜力。

2. 材料与方法

2.1 细胞与病毒

采用PIPEC细胞培养的P19代次疫苗株（TCID₅₀ 10^3.5/mL），经qPCR验证遗传稳定性。

2.2 动物实验

在韩国ABSL-3设施中，3头接种组（IM注射1 mL疫苗）与2头对照组（DMEM注射）妊娠母猪对比观察。有限空间下缩短适应期至3天，于18日孕龄诱导分娩。采集11日与20日（分娩完成）的血液、初乳及拭子样本，检测ASFV P72基因（Ct值<45为阳性）和抗体（cELISA S/N%≤40%为阳性）。

2.3 qPCR检测

使用WOAH认证的试剂盒（靶向P72基因），组织样本经Promega试剂盒提取DNA，肝脾中病毒载量最高（Ct值低至19.9）。

2.4 抗体检测

IDvet cELISA试剂盒测定血清与初乳抗体，计算S/N%值确认阳性阈值。

3. 结果

3.1 安全性

接种组母猪体温稳定（图1），分娩性能与历史数据一致：对照组22头仔猪中3头死胎（13.6%），接种组50头仔猪仅2头死胎（4%），证实无生殖毒性。

3.2 免疫原性

初乳中P72基因载量差异显著（V-1组Ct=22.5，V-2组Ct=38.4）。血清抗体阳性率随接种时间升高，18日时全部接种母猪呈阳性（S/N%最低10.3）。

3.3 垂直传播

未食初乳的仔猪器官中检出P72基因（脾脏Ct<20.1），证实经胎盘传播；初乳喂养仔猪60%携带抗体（V-1组80%阳性），但P72基因检出率仅40%-60%，提示抗体可能抑制病毒复制。

3.4 病理学

剖检未接种仔猪未见ASF特征病变，但淋巴组织普遍检出病毒基因，印证低致病性毒株的潜伏感染潜力。

4. 讨论

与ASFV-G-ΔI177L相比，ΔLVR双缺失株在妊娠期展现出更优安全性——未出现同类研究中的高死胎率（43%）或神经症状。初乳抗体的被动保护虽被证实，但其对野毒株的中和能力仍需挑战实验验证。值得注意的是，疫苗株在生殖系统的趋向性（如子宫内低拷贝数）可能降低垂直传播风险，但需警惕长期传代后的毒力返祖。

5. 结论

ASFV-G-ΔI177L/ΔLVR首次在妊娠末期母猪中实现安全性与免疫原性双达标，为田间应用奠定基础。未来需扩大样本量并评估母源抗体对仔猪主动免疫的干扰效应，以完善ASF净化策略。

（注：全文数据均源自原文表格与图示，未添加外部结论）