基于CBIS方法开发的高特异性抗CDH15单克隆抗体Ca15Mab-1在肌肉卫星细胞研究中的突破性应用

研究人员针对肌肉卫星细胞(SCs)标记物CDH15缺乏流式检测抗体的难题，采用细胞免疫筛选技术(CBIS)成功开发出高亲和力单抗Ca15Mab-1。该抗体可特异性识别CHO/CDH15转染细胞及内源性表达CDH15的Saos-2和C2C12细胞，解离常数达10-10M级，并适用于流式、免疫印迹和免疫组化，为肌肉再生研究和临床治疗提供重要工具。

　　

在肌肉生物学领域，卫星细胞(SCs)作为骨骼肌再生的关键干细胞群体，其特异性标记物的鉴定一直是研究难点。CDH15/M-钙黏蛋白作为SCs顶端膜的特异性标志物，在维持细胞静息状态和肌肉再生中发挥重要作用。然而长期以来，缺乏适用于流式细胞术的抗CDH15单克隆抗体(mAb)，严重制约了SCs的精准分选和功能研究。

日本东北大学的研究团队在《Biochemistry and Biophysics Reports》发表创新性研究，通过细胞免疫筛选技术(CBIS)成功开发出高特异性抗CDH15单抗Ca₁₅Mab-1。该研究采用CHO-K1细胞过表达系统建立CDH15稳定转染株，通过流式高通量筛选获得29个阳性杂交瘤克隆。最终获得的Ca₁₅Mab-1（IgG₁, κ型）展现出卓越性能：流式检测显示其对CHO/CDH15、人骨肉瘤Saos-2和小鼠肌母细胞C2C12的解离常数分别为6.1×10^-10 M、7.9×10^-10 M和9.8×10^-10 M；免疫印迹在110kDa处检出清晰条带；免疫组化成功显示细胞膜和胞质定位。

关键技术包括：1）建立CDH15过表达细胞模型；2）流式细胞术高通量筛选杂交瘤；3）结合亲和力测定；4）多平台验证（流式/免疫印迹/IHC）。研究团队特别采用PA16/MAP16标签系统确保膜蛋白正确折叠，并通过测序确认了抗体的互补决定区序列。

【特异性验证】Ca₁₅Mab-1仅识别CDH15而不与其他I型钙黏蛋白（CDH1-4）交叉反应，证实其高度特异性。

【跨种属识别】该抗体同时识别人源和小鼠源CDH15，为转化医学研究奠定基础。

【多平台兼容】突破性实现流式分选、Western blot和石蜡切片检测的一体化应用。

这项研究解决了肌肉干细胞研究领域长达二十年的技术瓶颈。CDH15特异性抗体将推动：1）SCs精准分选技术的革新，避免传统标记物（如VCAM-1、α7整合素）的非特异性问题；2）肌肉衰老和肌营养不良症发病机制研究，特别是探索卫星细胞异常激活与疾病进展的关系；3）抗体药物治疗开发，研究者已计划通过亚型转换（如改为IgG_2a）赋予其抗体依赖的细胞毒性(ADCC)功能，用于靶向清除病理状态下的异常SCs。

值得注意的是，该团队在骨肉瘤Saos-2细胞中检出CDH15表达，暗示其在肌肉源性肿瘤中的潜在诊断价值。未来研究将拓展至横纹肌肉瘤等其他肉瘤类型，为肿瘤生物学研究和治疗靶点发现提供新思路。这项技术突破不仅填补了基础研究工具空白，更为肌肉相关疾病的精准诊疗开辟了新途径。