大鼠超排卵技术中eCG-hCG注射间隔对卵母细胞获取及胚胎发育的关键影响

为解决不同品系大鼠对传统超排卵方案响应差异大的问题，研究人员系统探究了eCG-hCG注射间隔（48-80小时）对BN、Wistar、F344等品系大鼠超排卵效率的影响。研究发现延长间隔至72小时可使BN大鼠排卵数提升4-6倍（42.7 vs 7.0），并通过自然交配（44%受精率）和ICSI（91%受精率）证实所得卵母细胞具有正常发育潜能。该研究为基因编辑大鼠模型构建提供了关键技术支持。

　　

在生物医学研究中，大鼠作为重要模式生物的地位不可撼动，但不同品系对生殖调控技术的响应差异始终是困扰科学家的难题。以Brown Norway（BN）品系为例，这种广泛应用于高血压和免疫学研究的大鼠，却对常规超排卵方案"顽固不化"——传统48小时eCG（马绒毛膜促性腺激素）与hCG（人绒毛膜促性腺激素）注射间隔仅能获得个位数卵母细胞，严重制约了基因编辑等前沿研究的开展。这种"同鼠不同命"的现象背后，究竟隐藏着怎样的生物学机制？

大阪都市大学（原京都大学）的研究团队在《Heliyon》发表的研究给出了突破性答案。研究人员通过系统比较48-80小时不同注射间隔对BN、Wistar、F344/Stm和F344/DuCrlCrlj四个品系的影响，结合卵巢组织学分析和胚胎发育评估，揭示了品系特异性排卵调控的奥秘。

研究采用超排卵诱导、卵母细胞收集、自然交配受精、卵胞浆内单精子注射（ICSI）和胚胎移植等关键技术，特别针对BN大鼠建立了72小时优化方案。实验使用4-5周龄（未成年）和10-12周龄（成年）BN雌鼠，通过不同时间点注射300 IU/kg eCG和hCG，收集排卵后20-22小时的卵母细胞进行后续分析。

3.1 eCG-hCG注射间隔对BN大鼠超排卵的影响
成年BN大鼠在72小时间隔时排卵数达31.2个，较48小时组（11.0个）提升近3倍；未成年组更从7.0个飙升至42.7个。组织学显示72小时后卵泡直径显著增大，解释了对hCG响应增强的原因。

3.2 不同品系的响应差异
Wistar和F344/Stm品系对注射间隔不敏感（31.3-59.5个），而F344/DuCrlCrlj品系在72小时间隔时排卵数从13.6提升至34.3个，证实品系差异的普遍性。

3.3 成年BN大鼠卵母细胞的发育潜能
通过调整交配时间（hCG后8小时），使受精率达到44%，胚胎移植后46%发育为健康后代，证明延长间隔不会损害卵母细胞质量。

3.4 ICSI在未成年BN大鼠的应用
采用含蛋白酶抑制剂MG132的ICSI技术，获得91%受精率和17%的活产率，为未成年供体应用提供新思路。

这项研究不仅破解了BN大鼠"排卵难"的困局，更建立了普适性的品系特异性方案优化策略。通过揭示卵泡发育时序的品系差异，为生殖生物学提供了新的理论基础。在应用层面，72小时方案使BN大鼠单次实验获卵量达到基因编辑要求，配合ICSI技术可充分利用未成年供体，大幅提升研究效率。这些发现对罕见疾病模型构建、生殖障碍机制研究具有重要价值，特别是为需要大规模胚胎操作的基因编辑研究扫清了技术障碍。正如研究者指出，这种"量体裁衣"式的方案优化思路，可推广至其他响应异常的实验动物品系，为生物医学研究提供更强大的工具支撑。