共轭胆汁酸驱动CD14+CD16+单核细胞浸润通过增强肝细胞坏死性凋亡促进胆汁淤积性肝损伤

《JHEP Reports》：Conjugated Bile Acid-Driven CD14+CD16+ Monocyte Infiltration Promotes Cholestatic Liver Injury by Enhancing Hepatocyte Necroptosis

本研究揭示了胆汁淤积性肝损伤的新机制：共轭胆汁酸通过JNK/c-Jun信号通路上调肝细胞CCL2和CCL3表达，招募CD14+CD16+单核细胞浸润，后者分泌TNFα和FASL激活RIPK1-RIPK3-MLKL轴诱导肝细胞坏死性凋亡。该发现为靶向单核细胞趋化或坏死性凋亡通路治疗胆汁淤积提供了新策略。

　　

胆汁淤积性肝病是临床常见的难治性肝病，其特征是胆汁酸在肝脏和全身循环中异常积聚。尽管已知炎症反应和细胞死亡是导致肝损伤的关键因素，但特定免疫细胞亚群的作用机制尚不明确。尤其令人困惑的是，单核细胞中的CD14⁺CD16⁺中间亚型在胆汁淤积中显著增加，但其具体功能和调控机制仍是未解之谜。与此同时，肝细胞死亡形式复杂多样，近年发现的坏死性凋亡——一种受调控的细胞坏死形式，在胆汁淤积中的作用机制也亟待阐明。

针对这些科学问题，陆军军医大学第一附属医院的研究团队开展了一项创新性研究。他们通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)和多色免疫荧光技术，首次系统解析了胆汁淤积患者肝脏非实质细胞的异质性，发现CD14⁺CD16⁺单核细胞浸润与肝损伤程度呈正相关。研究论文发表在肝病学权威期刊《JHEP Reports》上。

研究人员采用了多项关键技术：对梗阻性胆汁淤积(OC)患者和对照组肝脏样本进行5'/3'端scRNA-seq分析；建立1%石胆酸(LCA)饮食诱导的小鼠胆汁淤积模型，并采用人源CD14⁺CD16⁺单核细胞过继转移；通过流式细胞术分选患者外周血单核细胞亚群；运用染色质免疫沉淀(ChIP)验证转录因子结合活性等。

单细胞转录组分析揭示胆汁淤积肝脏免疫微环境特征
通过对4例OC患者和4例对照者的34,623个肝脏非实质细胞进行scRNA-seq，鉴定出25个细胞簇和10个细胞谱系。特别值得注意的是，OC患者肝脏中CD14⁺CD16⁺单核细胞比例显著增加，这一发现在原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者肝脏中得到验证。

CD14⁺CD16⁺单核细胞浸润加重胆汁淤积性肝损伤
在免疫缺陷M-NSG小鼠模型中，输注人CD14⁺CD16⁺单核细胞使1%LCA饮食诱导的血清ALT和AST水平显著升高。类似地，输注小鼠中间型单核细胞也加重了肝损伤。组织学分析显示，单核细胞浸润导致肝坏死和炎症评分显著增加。

坏死性凋亡通路激活是肝细胞死亡的关键机制
研究发现CD14⁺CD16⁺单核细胞通过分泌TNFα和FASL激活RIPK1-RIPK3-MLKL信号轴。Western blot显示输注单核细胞的小鼠肝脏中RIPK1、RIPK3和MLKL磷酸化水平显著升高，同时伴随MLKL膜转位——这是坏死性凋亡执行的标志性事件。

胆汁酸-JNK/c-Jun-CCL2/CCL3轴驱动单核细胞浸润
机制研究表明，共轭胆汁酸(如TCA、TCDCA)通过激活JNK/c-Jun信号通路，增强c-Jun与CCL2和CCL3启动子的结合，促进这两种趋化因子的表达。Transwell实验证实，抗CCL2/CCL3中和抗体可显著抑制CD14⁺CD16⁺单核细胞的迁移能力。

这项研究首次阐明了CD14⁺CD16⁺单核细胞在胆汁淤积性肝损伤中的关键作用：共轭胆汁酸→JNK/c-Jun→CCL2/CCL3→单核细胞浸润→TNFα/FASL→RIPK1-RIPK3-MLKL→肝细胞坏死性凋亡的级联反应机制。该发现不仅深化了对胆汁淤积发病机制的认识，更重要的是提出了靶向单核细胞趋化或坏死性凋亡通路的新型治疗策略，为开发特异性更高的胆汁淤积治疗药物提供了理论依据。研究采用的单细胞测序与功能验证相结合的策略，也为其他肝脏疾病的机制研究提供了方法学参考。