多组学测序揭示HBV相关肝癌中T细胞耗竭异质性及HBV整合的免疫微环境特征

为解决HBV相关肝癌（HCC）肿瘤免疫微环境（TIME）异质性及治疗响应差异，韩国天主教大学团队通过单细胞RNA测序（scRNA-seq）、全外显子测序（WES）等多组学技术，首次揭示T细胞耗竭（T-cell exhaustion）高/低分组与HBV整合、TP53突变及增殖亚型的显著关联。研究发现高耗竭组CD8+ Teff细胞克隆扩增（Gini指数0.83 vs 0.48）及CD4+ Treg/Tfh细胞活化增强，为个性化免疫治疗提供新靶点。

　　

肝癌是全球癌症相关死亡的第三大原因，其中乙肝病毒（HBV）感染是主要诱因。尽管免疫检查点抑制剂（ICI）为晚期肝癌带来新希望，但患者响应率不足20%，这背后隐藏着肿瘤免疫微环境（TIME）的复杂异质性。尤其令人困惑的是，为何部分HBV相关肝癌患者表现出更显著的T细胞耗竭特征？这种耗竭状态如何与病毒致癌机制相互作用？韩国天主教大学（The Catholic University of Korea）的研究团队在《JHEP Reports》发表的最新研究，通过多组学测序技术揭开了这一谜团。

研究人员采用单细胞RNA测序（scRNA-seq）、T细胞受体测序（scTCR-seq）等前沿技术，对8例病毒相关肝癌患者的肿瘤组织进行多维度解析，并在106例独立队列中验证发现。关键实验技术包括：基于NGS的HBV整合分析、全转录组测序（WTS）评估分子亚型、共聚焦显微镜验证免疫细胞浸润。

T细胞亚群与耗竭异质性

通过分析32,555个T细胞，发现高耗竭组（n=2）CD8⁺效应记忆T细胞（Teff）中PDCD1、LAG3等耗竭标志物表达显著升高（P<0.001），且克隆扩增程度更高（Gini指数0.83 vs 0.48）。轨迹分析显示，这些细胞沿耗竭分支（Branch 2）分化，伴随GNLY⁺细胞毒性T细胞（Tcyt）减少。

CD4⁺ T细胞的调控作用

高耗竭组CD4⁺滤泡辅助T细胞（Tfh）和调节性T细胞（Treg）比例增加（P<0.001），其中Tfh细胞高表达IL21和CXCL13，体外实验证实IL-21可诱导PD-1、CTLA-4上调。共聚焦显微镜显示该组Breg细胞（CD38⁺CD19⁺）浸润增多，形成免疫抑制网络。

基因组特征与HBV整合

全外显子测序发现高耗竭组TP53突变率100%，而低耗竭组（n=6）以TERT突变为主。NGS分析揭示高耗竭组HBV整合位点更多（P=0.033），尤其富集于S/X致癌区，伴随cccDNA/pgRNA水平升高。验证队列中28例高耗竭患者同样显示更强的增殖亚型特征（P<0.001）和HBV S融合转录本表达。

这项研究首次建立HBV整合→TP53突变→T细胞耗竭→增殖亚型的级联关联，为HBV相关肝癌的免疫治疗分层提供分子标志物。尤其值得注意的是，高耗竭组中IL21⁺ Tfh细胞的调控作用及HBV直接致癌机制的协同效应，提示联合靶向病毒复制与T细胞激活可能是突破治疗瓶颈的新策略。韩国团队的多组学整合分析范式，为理解肝癌免疫逃逸机制树立了新的研究标杆。