周氏启灵汤通过抑制癌相关成纤维细胞分泌神经调节蛋白1改善前列腺癌恩杂鲁胺耐药性的机制研究

本研究针对前列腺癌治疗中恩杂鲁胺耐药性这一临床难题，通过建立癌相关成纤维细胞(CAFs)与耐药性前列腺癌细胞共培养模型，首次揭示周氏启灵汤(ZQD)通过抑制CAFs分泌神经调节蛋白1(NRG1)，阻断NRG1-HER3信号通路，显著逆转恩杂鲁胺耐药性并抑制肿瘤增殖。该发现为克服前列腺癌靶向治疗耐药提供了创新性中药干预策略。

　　

前列腺癌作为全球男性第二大常见恶性肿瘤，其治疗面临严峻挑战。尽管第二代抗雄激素药物恩杂鲁胺显著延长了患者生存期，但耐药性问题始终未能突破。更棘手的是，近年研究发现肿瘤微环境中的癌相关成纤维细胞(CAFs)会通过分泌神经调节蛋白1(NRG1)等因子，激活癌细胞中的人表皮生长因子受体3(HER3)信号通路，成为导致耐药的关键"帮凶"。面对这一医学难题，上海中医药大学附属龙华医院的研究团队将目光投向了传统中药周氏启灵汤(ZQD)——该方剂由七叶一枝花种子、益母草、冬凌草根等8味药材组成，前期临床研究已显示其能显著改善前列腺癌患者预后。

研究人员采用血清药理学方法制备ZQD含药血清，建立CAFs与恩杂鲁胺耐药前列腺癌细胞(PC3-EnzR/DU145-EnzR)的共培养模型，结合体内异种移植实验，系统评估了ZQD的抗肿瘤效果。关键技术包括：从临床标本分离原代CAFs、建立药物耐药细胞系、Transwell共培养系统、qRT-PCR和Western blotting检测NRG1-HER3通路相关分子表达、以及裸鼠移植瘤模型等。

研究结果揭示：

1. ZQD含药血清抑制CAFs中NRG1表达
   通过ELISA和Western blotting证实，ZQD含药血清以剂量依赖方式降低CAFs中NRG1的mRNA和蛋白表达水平，且特异性作用于CAFs而非正常成纤维细胞。

2. ZQD逆转CAFs诱导的恩杂鲁胺耐药
   共培养实验显示，CAFs使耐药细胞的IC₅₀值升高3-5倍，而2% ZQD含药血清处理可显著降低IC₅₀值，MTT实验证实细胞活力同步下降。

3. ZQD抑制CAFs促增殖作用
   10天长期培养发现，ZQD含药血清使CAFs刺激下的耐药细胞集落形成数减少60%-70%，显著优于单用恩杂鲁胺组。

4. ZQD阻断NRG1-HER3信号传导
   Western blotting检测显示，ZQD含药血清处理使共培养系统中pHER3水平降低2-3倍，同时ELISA检测到培养基中NRG1分泌量减少约80%。

5. ZQD下调MMPs表达
   在共培养条件下，ZQD含药血清处理使基质金属蛋白酶MMP1和MMP9蛋白表达分别降低45%和55%，提示其可能通过调节细胞外基质重塑抑制肿瘤转移。

6. 体内实验验证抗肿瘤效果
   在PC3-EnzR细胞移植瘤模型中，ZQD给药28天使肿瘤体积缩小52%，重量减轻47%，肿瘤组织中NRG1表达显著下调，增殖标志物PCNA和Ki67 mRNA水平同步降低。

这项研究首次阐明ZQD通过靶向肿瘤微环境中的CAFs，抑制NRG1-HER3信号轴，从而逆转恩杂鲁胺耐药的多重作用机制。特别值得注意的是，ZQD对CAFs的特异性调控作用，为克服传统靶向药物"只盯癌细胞"的治疗局限提供了新思路。从转化医学角度看，该研究不仅为中药复方治疗耐药性前列腺癌提供了高级别证据，更揭示NRG1-HER3通路可作为中西医结合治疗的重要靶点。鉴于CAFs在多种肿瘤耐药中的普遍作用，这一发现还可能拓展至其他恶性肿瘤的治疗领域。未来研究可进一步探索ZQD与其他抗癌药物的协同效应，以及其对PI3K/AKT等下游信号通路的调控细节，为临床转化提供更充分的理论依据。