利用摇床系统与过表达RSPO1的HUVEC共培养快速形成球体增强原代肝细胞长期存活与自我更新能力

为解决原代猪肝细胞体外快速去分化难题，研究人员通过摇床系统构建3D球体培养模型，创新性地采用过表达屋顶板特异性海绵蛋白1(RSPO1)的人脐静脉内皮细胞(R-HUVECs)共培养策略。研究发现该体系可维持肝细胞功能达28天，为肝脏治疗和药物研发提供了规模化、高活性的细胞资源平台。

　　

猪原代肝细胞虽因易获取和功能强大成为肝病治疗的重要资源，但其体外培养时快速失去特性（去分化）的问题严重制约规模化应用。这项研究突破性地将摇床培养系统（rocker system）与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共培养相结合，通过添加Wnt信号通路关键激活因子——屋顶板特异性海绵蛋白1（Roof plate-specific spondin 1, RSPO1），成功构建出仿生3D肝细胞球体。

实验采用无血清培养基，先通过普通HUVEC共培养形成球体，继而引入基因改造过表达RSPO1的HUVEC（R-HUVECs）。令人振奋的是，三维微环境与RSPO1产生协同效应：不仅显著提升肝细胞增殖能力，更维持了白蛋白合成、尿素循环等关键肝功能指标。经特殊处理的R-HUVEC共培养组，肝细胞球体存活周期突破性地达到28天。

该技术方案一举攻克了传统培养中规模（scale）、产量（yield）和功能持续性（functional sustainability）三大瓶颈，为生物人工肝系统、药物肝毒性测试等应用提供了稳定可靠的细胞来源，在再生医学和药筛领域展现出广阔前景。