三种商业化快速免疫分析法在艰难梭菌感染诊断中的性能评估与临床应用价值

这篇研究系统评估了C. diff Quik Chek Complete等三种商业化快速免疫分析法对艰难梭菌感染（CDI）的诊断效能。结果表明，这些试剂能同步检测谷氨酸脱氢酶（GDH）和毒素A/B，与核酸扩增试验（NAAT）联用可优化现行两步诊断流程（敏感筛查+特异性确认），其中TechLab产品表现最优（毒素检测阳性符合率71.4%）。研究还通过全基因组测序（WGS）揭示了菌株特性对检测敏感性的潜在影响，为临床快速诊断提供了重要依据。

　　

ABSTRACT

当前指南推荐采用两步法诊断艰难梭菌感染（CDI），本研究评估了三种可同时检测GDH和毒素A/B的商业化快速免疫分析法。通过分析临床疑似患者的粪便样本，结合NAAT和培养结果，发现三种试剂GDH检测与tcdA基因的阳性符合率均达100%，但毒素A/B检测差异显著：C. diff Quik Chek Complete表现最佳（71.4%），而CerTest和ImmunoCard STAT!仅约50%。冷冻保存会显著降低GDH和毒素检出率。全基因组测序显示60株分离株涵盖23种序列型（ST），均携带tcdA/tcdB基因，但tcdC基因突变与毒素检测结果无明确关联。

INTRODUCTION

艰难梭菌（Clostridioides difficile）作为革兰阳性厌氧芽孢杆菌，是抗生素相关性腹泻和假膜性结肠炎的主要病原体。现行诊断金标准NAAT虽敏感但易导致过度诊断，而毒素酶免法（EIA）特异性高但灵敏度不足。欧洲临床微生物和感染病学会（ESCMID）推荐的两步算法（GDH/NAAT初筛+毒素确认）亟需高效整合方案。本研究聚焦三种可一站式完成两步检测的快速免疫试剂，并首次通过WGS解析菌株特性对检测的影响。

MATERIALS AND METHODS

研究纳入2019年5月瑞典厄勒布鲁大学医院的57例连续粪便样本及47例NAAT阳性冻存样本。采用TechLab、CerTest和Meridian的免疫试剂平行检测GDH/毒素，以Alethia LAMP法为参照。通过ChromID选择性培养基分离菌株，MALDI-TOF MS鉴定后，使用Illumina MiSeq进行全基因组测序和核心基因组MLST（cgMLST）分析。

RESULTS

1. 连续样本检测：C. diff Quik Chek Complete毒素检测阳性符合率显著优于另两种试剂（71.4% vs 50.0%/51.7%），但差异未达统计学显著性（P=0.472）。

2. 冻存样本分析：冷冻使GDH检出率降低约10%，毒素A/B检出率下降更显著（TechLab 55.3% vs CerTest 38.3%）。

3. 菌株特征：60株分离株覆盖ST2（11株）、ST16（6株）等23个序列型，仅1株为高毒力ST1/RT027。所有菌株均产毒，但tcdC基因缺失（如ST5/ST11的中间缺失）与粪便毒素检测结果无规律性关联。

DISCUSSION

该研究揭示了快速免疫分析法在CDI诊断中的双刃剑特性：

• 技术优势：C. diff Quik Chek Complete可在30分钟内完成检测，93%样本无需二次确认，极大缩短周转时间（TAT）。

• 应用局限：冷冻样本的敏感性衰减问题突出，提示临床应优先使用新鲜样本。

• 菌株影响：尽管ST1/RT027特有的tcdC^Δ117突变可能增强毒素表达，但大多数流行菌株的毒素检测差异仍需更多机制研究。

研究创新性在于通过WGS揭示了检测差异的潜在分子基础，为优化诊断策略提供了重要依据。未来需扩大样本量验证不同流行株系的检测阈值，并探索毒素蛋白稳定性对免疫分析法的影响机制。