综述：失能性感染单周期（DISC）病毒平台在非洲猪瘟（ASF）新一代疫苗开发中的潜力

这篇综述深入探讨了失能性感染单周期（DISC）病毒技术作为非洲猪瘟（ASFV）新一代疫苗开发平台的潜力。文章系统分析了ASFV的复制周期关键基因靶点（如A104R、B602L等），对比了传统减毒活疫苗（LAV）的安全性问题，并提出了DISC疫苗在避免毒力回复和重组风险上的优势。同时，综述指出当前挑战包括细胞基质限制、病毒基因组多样性及诊断标记（DIVA）兼容性，为ASF疫苗研发提供了创新方向。

　　

1. 引言

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的高致死性动物疫病，对全球养猪业造成严重经济损失。ASFV属于Asfarviridae科，基因组庞大（170-190 kb），编码151-167个开放阅读框，具有复杂的免疫逃逸机制。尽管减毒活疫苗（LAV）如ASFV-G-ΔI177L已在部分国家获批，但其存在毒力回复、水平传播等安全隐患，促使研究者探索非复制型疫苗（如DISC病毒）作为更安全的替代方案。

2. 第一代基因修饰减毒活疫苗

通过基因敲除技术开发的LAV（如删除I177L、MGF360/505基因簇）在动物实验中显示出对同源毒株的攻击保护效果，但部分疫苗仍导致低至中度病毒血症或短暂临床症状。越南批准的NAVET-ASFVAC和DACOVAC-ASF2等疫苗虽取得突破，但需警惕重组事件（如基因1型与2型毒株重组产生致死性新毒株）对疫苗安全性的影响。

3. DISC病毒技术原理与应用

DISC病毒通过删除复制必需基因（如HSV-2的UL5/UL29、蓝舌病毒的VP6）实现单周期复制，保留完整抗原表达的同时避免病毒扩散。在ASFV中，组蛋白样蛋白pA104R（A104R基因）的缺失可阻断病毒包装，但早期尝试因野生型病毒竞争未能稳定传代。其他成功案例包括疱疹病毒疫苗Dl5-29（已完成I期临床试验）和痘苗病毒载体SCV（基于CHO细胞生产平台）。

4. ASF DISC疫苗开发策略

4.1 关键基因靶点筛选

候选基因包括：

• 复制相关：E301R（DNA滑动夹）、E296R（核酸内切酶）

• 形态发生相关：B602L（p72伴侣蛋白）、E248R（膜蛋白）

• 宿主互作：CP204L（介导病毒内吞）

  表型验证显示，抑制B602L导致病毒颗粒组装缺陷，但可能影响主要衣壳蛋白p72的免疫原性。

4.2 新型基因编辑技术

CRISPR/Cas9和IS110桥接重组系统可提高基因编辑效率，而细菌人工染色体（BAC）技术已成功用于ASFV-Kenya-IX-1033基因组重构。

4.3 DIVA兼容性设计

通过插入外源标记抗原或删除特定免疫原性蛋白（如EP402R），实现疫苗接种与自然感染的血清学区分。

5. 挑战与展望

5.1 细胞基质限制

目前依赖原代猪巨噬细胞，但永生化细胞系如ZMAC-4（需M-CSF）或转基因表达CD163/Siglec1的细胞株展现出替代潜力。

5.2 病毒株异质性

不同基因型毒株（如Georgia/07与BA71V）的必需基因存在差异（如A104R在BA71V中必需而在Georgia 2010中非必需），需针对性验证。

5.3 安全性风险

DISC疫苗虽降低毒力回复概率，但若与野毒株共感染仍可能发生重组。连续传代实验显示，LAV中C257L蛋白突变可导致毒力恢复，提示需长期监测。

6. 结论

DISC平台为ASFV疫苗开发提供了兼顾安全性与免疫原性的新路径，但需解决细胞培养体系、基因靶点普适性及规模化生产等瓶颈。未来研究应聚焦宿主-病毒互作机制和跨基因型保护抗原的发掘，以推动ASF防控的突破性进展。