GalNac修饰红细胞外囊泡靶向递送系统在肝病治疗中的突破性应用

本研究创新性地开发了GalNac修饰的红细胞外囊泡（RBC-EVs）靶向递送系统，通过结合三触角N-乙酰半乳糖胺（GalNac）与去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）的高亲和力特性，实现了对肝细胞的精准靶向。该系统可同时递送miR-155反义寡核苷酸（ASO）和PARP-1抑制剂PJ34等治疗分子，在急性肝衰竭（ALF）、非酒精性脂肪肝（NAFLD）和肝细胞癌（HCC）模型中显著抑制PANoptosis（凋亡/焦亡/坏死性凋亡）、改善脂代谢紊乱并抑制肿瘤生长，且未观察到明显毒性，为肝病精准治疗提供了新策略。

　　

GalNac-RBC-EVs的构建与靶向验证
研究团队通过钙离子载体诱导法从O型血健康供体红细胞中提取外囊泡（RBC-EVs），经透射电镜（TEM）和纳米颗粒追踪分析（NTA）证实其具有典型双凹盘状结构（直径144.4±48.0 nm），并高表达TSG101、Alix等EV标志蛋白。通过胆固醇锚定将GalNac-miRNA复合物修饰于囊泡膜表面，流式细胞术和免疫荧光证实修饰后的GalNac-RBC-EVs可通过ASGPR介导的内吞作用特异性靶向肝细胞，在-80°C保存6个月后仍保持稳定性。

ALF治疗：抑制PANoptosis三重死亡通路
在D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭模型中，RBC-EVs/GalNac-miR-155-ASO组较游离GalNac-miR-155-ASO组显著降低肝组织miR-155表达（P<0.001），血清ALT/AST水平下降超过50%。机制研究发现该治疗可同步抑制：

1. 焦亡通路：下调NLRP3炎症小体活性及GSDME表达（P<0.0001）
2. 凋亡通路：降低cleaved caspase-3/7/8和Bax/Bcl-2比值（P<0.0001）
3. 坏死性凋亡：抑制RIP1/RIP3/MLKL磷酸化（P<0.0001）
   关键调控节点ZBP1的表达量减少82%，证实其通过多途径协同保护肝细胞。

NAFLD治疗：PARP-1抑制改善脂代谢
高脂饮食模型中，电穿孔法负载PJ34的GalNac-RBC-EVs（载药量5μg PJ34/100μg EVs）使肝组织PARP-1活性降低67%。治疗组呈现：
• 血清指标：TG（1.2→0.6 mmol/L）、LDL（3.1→1.8 mmol/L）显著下降（P<0.0001）
• 病理改善：油红O染色显示脂滴数量减少73%，Masson染色显示胶原沉积减少58%
• 机制特征：恢复脂肪酸氧化相关基因PPARα、CPT1α表达

HCC治疗：Rab7沉默增强药物蓄积
创新性构建的RBC-EVs/GalNac-Rab7-siRNA/PJ34三合一系统通过：

1. Rab7敲除（效率69.5%）阻断溶酶体融合，延长PJ34胞内滞留时间
2. 协同抑制PARP-1/CD36轴，使Hepa1-6细胞凋亡率提升至38.7%
3. 体内实验显示肿瘤体积缩小81%（P<0.0001），且无骨髓抑制等副作用

安全性评估与转化潜力
28天毒性试验显示：
• 主要器官组织学评分与对照组无差异（P>0.05）
• 血液学参数（WBC/RBC/PLT）保持稳定
该平台兼具红细胞囊泡的天然生物相容性与GalNac的精准靶向性，单次给药可实现72小时持续释放，为临床转化提供重要依据。未来需在灵长类模型中验证其长期安全性，并探索双特异性配体改造等优化策略。