天冬氨酸β-羟化酶（ASPH）抑制通过激活CD8+T细胞适应性免疫增强抗肿瘤疗效的机制研究

这篇研究揭示了天冬氨酸β-羟化酶（ASPH）抑制剂MO-I-1151通过增强DNA疫苗诱导的CD8+T细胞适应性免疫，显著抑制MHC-I低表达肿瘤生长。结合单细胞RNA测序（scRNA-seq）和流式细胞术，证实ASPH抑制可减少肿瘤微环境（TME）中调节性T细胞（Tregs），同时激活自然杀伤（NK）细胞、树突状细胞（DCs）和巨噬细胞的抗肿瘤功能，为联合免疫治疗提供了新策略。

　　

引言

天冬氨酸β-羟化酶（ASPH）在胚胎发育中调控细胞迁移，但在成人组织中表达极低。研究发现70-90%的实体瘤过度表达ASPH，其通过羟基化Notch1等底物激活促癌通路，促进肿瘤增殖、转移和免疫逃逸。尽管ASPH小分子抑制剂（SMIs）已显示抗肿瘤活性，但其对免疫系统的影响尚不明确，尤其对CD8⁺T细胞的调控机制亟待探索。

材料与方法

研究采用MHC-I可逆性下调的小鼠TC-1/A9肿瘤模型，通过基因枪递送靶向HPV16 E7的DNA疫苗（PADRE.E7GGG），联合ASPH抑制剂MO-I-1151或免疫佐剂ODN1826（含CpG基序）。流式细胞术分析脾脏和肿瘤免疫细胞亚群，ELISPOT检测IFN-γ分泌，scRNA-seq解析TME中细胞转录组特征，CellChat预测细胞间通讯网络。

结果

1. 肿瘤生长抑制：ASPH抑制剂单用无显著疗效，但与DNA疫苗联用使肿瘤体积减少50%（p<0.001），且CD8⁺T细胞耗竭实验证实其关键作用。
2. 免疫细胞动态：
   • 脾脏：联合治疗组CD8⁺T细胞比例降低，但ELISPOT显示其抗原特异性活化增强3倍。
   • 肿瘤：DNA疫苗单用增加CD8⁺T和浆细胞样DCs（pDCs）浸润，而联合治疗显著减少Tregs（p<0.05）。
3. 单细胞解析：scRNA-seq发现联合治疗激活CD8⁺T细胞的细胞毒性通路（如GZMB、IFNG），同时下调Tregs的免疫抑制标志物（FOXP3、CTLA4）。巨噬细胞中抗原呈递和炎症反应通路（如CCL2-7、IL15）显著富集。
4. 细胞互作：PD-L1和CD80信号网络在联合治疗后重构，DC与CD8⁺T细胞通讯增强，而Tregs的抑制性交互减少。

讨论

ASPH抑制可能通过双重机制增强免疫：

1. 直接调控髓系细胞：ASPH在DCs和巨噬细胞高表达，抑制其酶活可促进促炎因子（如IL-12）分泌，间接激活T细胞。
2. 解除肿瘤免疫抑制：ASPH抑制减少肿瘤源性外泌体对NK细胞的负调控（如NKG2D下调），并削弱Tregs的免疫抑制功能。

局限性包括仅使用单一肿瘤模型，且未明确ASPH在免疫细胞中的异构体表达。未来需在更多MHC-I异质性模型中验证，并探索ASPH抑制剂与PD-1/CTLA-4抑制剂的协同潜力。

结论

ASPH抑制通过重塑TME中淋巴-髓系免疫平衡，增强DNA疫苗疗效，尤其对MHC-I低表达肿瘤具有突破性意义。该研究为克服肿瘤免疫抵抗提供了创新组合策略，并提示ASPH可作为泛癌种免疫治疗的新靶点。