αIIbβ3/SRC下游RhoA通路激活异常导致杂合性Bernard-Soulier综合征的机制研究及ROCK1/2抑制剂的治疗潜力

本研究针对杂合性Bernard-Soulier综合征（BSS）患者GP1BA基因突变（p.N103D）导致的血小板减少和巨大血小板表型，通过诱导多能干细胞（iPSC）模型结合3D骨髓微环境模拟系统，首次揭示αIIbβ3/SRC介导的RhoA通路过度激活是疾病核心机制，并证实ROCK1/2抑制剂可特异性恢复杂合突变患者的血小板生成。该研究为BSS的精准治疗提供新靶点。

　　

在血液学领域，Bernard-Soulier综合征（BSS）一直是个令人困惑的难题。这种以血小板减少、巨大血小板和出血倾向为特征的遗传性疾病，传统认为是由GP1BA、GP1BB或GP9基因的双等位突变导致糖蛋白GPIb-IX复合物缺陷引起。但临床上存在一类特殊患者——他们仅携带单等位基因突变，却表现出典型的BSS症状，其发病机制长期未明。更棘手的是，现有治疗手段对这类患者效果有限，亟需揭示其分子机制并开发针对性疗法。

为解开这个谜团，研究人员从一名携带新型杂合突变GP1BA^N103D的BSS患者入手，通过前沿的诱导多能干细胞（iPSC）技术构建疾病模型。这项发表在《Haematologica》的研究首次阐明：位于GPIbα胞外LRR4结构域的N103D突变虽不影响受体表达，却通过αIIbβ3/SRC信号轴异常激活RhoA通路，最终导致血小板生成障碍。更引人注目的是，团队独创的3D丝蛋白骨髓模型证实，ROCK1/2抑制剂Y27632能特异性纠正杂合突变患者的血小板缺陷，为精准治疗开辟新途径。

研究采用多学科交叉技术：从患者外周血获取CD34⁺细胞建立iPSC系；通过流式细胞术和共聚焦显微镜分析巨核细胞（MK）分化标志物；利用FRET生物传感器动态监测RhoA/CDC42活性；开发功能性3D丝支架模型模拟骨髓微环境下的血小板释放；结合磷酸化蛋白质组学筛选关键信号节点。

GPIbα^N103D表达对巨核细胞的影响

研究发现突变不影响MK表面GPIb-IX复合物表达（CD41/CD42a/CD42b）或胞内DMS结构，计算机模拟显示N103D未改变GPIbα三维构象。免疫共沉淀证实其与细丝蛋白A（FLNa）的结合保留，但血栓素激活后P-选择素表达降低，提示信号转导异常。

异常的胞质分裂过程

在3D骨髓模型中，突变型MK产生的血小板数量减少3.35倍且体积显著增大，电镜显示典型巨大血小板形态。特别值得注意的是，当MK黏附于纤维蛋白原时，突变组的胞质分裂（PPF）缺陷加剧2.5倍，暗示αIIbβ3介导的外向内信号异常。

RhoA通路的异常激活

FRET分析显示突变MK中RhoA活性升高而CDC42活性降低。免疫荧光发现纤维蛋白原上MK应激纤维形成增加2.5倍，且磷酸化肌球蛋白轻链（P-MLC2）共定位异常。机制上，磷酸化蛋白质组检测到SRC^Y419和STAT3^Y705磷酸化增强，SRC抑制剂达沙替尼可逆转应激纤维表型。

ROCK抑制的治疗潜力

在3D模型中，Y27632处理使杂合突变患者（p.N103D、p.L160P和p.N150S）的血小板数量恢复至近正常水平（最高提升4.67倍），并显著减小血小板直径。但对双等位突变BSS患者无效，证实杂合与纯合突变存在不同发病机制。

这项研究突破性地揭示了杂合性BSS的核心机制——GPIbα胞外结构域突变通过SRC/STAT3/RhoA级联反应导致αIIbβ3预激活和细胞骨架重构异常。3D骨髓模型的治疗验证为临床转化提供直接依据：针对特定突变类型的ROCK抑制剂可能成为精准治疗策略。该发现不仅解决长期悬而未决的病理机制争议，更为罕见血小板疾病的靶向治疗树立新范式。