克氏锥虫新型封闭式血培养系统(CBCS)的建立与标准化：提升寄生虫分离效率的创新方法

本研究针对克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)培养缺乏标准化方案的难题，开发了封闭式血培养系统(CBCS)。研究人员通过人工感染不同浓度锥鞭毛体的血液样本验证，该系统可实现低至10个寄生虫/mL的稳定分离，32天内完成锥鞭毛体向上鞭毛体的转化，重复性与再现性变异系数均<9%。该成果为恰加斯病诊断和流行病学研究提供了可靠技术平台。

　　

在拉丁美洲肆虐的恰加斯病(Chagas disease)由克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)感染引起，每年造成约1.2万人死亡。尽管该病发现已逾百年，其诊断技术仍面临重大挑战——特别是在寄生虫分离培养环节，现有方法存在样本需求量大(5-30mL)、培养周期长(60-150天)、成功率波动大等技术瓶颈。更棘手的是，全球实验室使用的培养方案差异显著，涉及培养基类型(脑心浸液/BHI、肝浸液/LIT等)、离心参数(1500-3000rpm)等十余项变量，导致研究数据难以横向比较。

针对这一现状，哥伦比亚军事中央医院(Hospital Militar Central)感染与热带病研究组的Vanegas MA团队开展了一项创新研究。他们设计开发的封闭式血培养系统(CBCS)采用30mL玻璃瓶装载4mL固体+5mL液体双相培养基，仅需2-5mL血液样本即可实现寄生虫扩增。相关成果发表于《Parasitology Research》，为克氏锥虫研究提供了首个标准化培养方案。

研究采用三项关键技术：1)建立VERO细胞感染模型获取锥鞭毛体(trypomastigotes)；2)人工配制含血红素(hemin)和双相培养基的CBCS系统；3)通过Neubauer血细胞计数板定量评估寄生虫增殖动力学。所有实验均设传统Tobie培养基对照，在28°C下进行32天观察。

【Trypanosoma cruzi viability in the CBCS】

结果显示，接种100个锥鞭毛体的CBCS在24天达到峰值浓度(3853 parasites/mL)，与传统培养(4858 parasites/mL)相当。吉姆萨染色证实第28天100%转化为上鞭毛体(epimastigotes)，运动形态保持率达61-97%。值得注意的是，2mL样本组的增殖曲线与对照高度吻合，而5mL组虽产量较低但仍满足分离需求。

【Minimum T. cruzi concentration required】

突破性发现在于灵敏度——仅需10个锥鞭毛体/mL即可成功分离，且最早第4天检出。这与传统方法需60天以上形成鲜明对比。各浓度组(10¹-10⁴ parasites/mL)的运动形态保持率均>50%，证实系统稳定性。

【Performance of the CBCS】

重复性测试中，10³-10⁴ parasites/mL组的变异系数(CV)<6%，即使最低浓度(10 parasites/mL)组CV也<20%。再现性实验显示三日间CV始终<8.3%，符合ISO标准对分析方法的要求。

该研究首次实现克氏锥虫分离培养的标准化突破：1)灵敏度提升600倍；2)培养周期缩短81%；3)样本量减少60%。特别值得注意的是，系统对DTU I型(MHOM/CO/2001/D.A株)的优异适应性，为后续基因分型研究奠定基础。封闭设计还解决了传统操作的污染风险，使其适用于野外采样场景。未来扩展至其他DTU型别及锥虫近缘种(如T. rangeli)的验证值得期待，或将重塑热带寄生虫病研究的技术格局。