基于实验设计开发快速同步RP-HPLC方法用于卡培他滨与姜黄素在纳米颗粒及血浆中的稳定性评价

本研究针对卡培他滨(CAP)与姜黄素(CUR)联合用药缺乏同步检测方法的难题，开发了一种基于质量源于设计(QbD)理念的RP-HPLC分析方法。研究人员采用Box-Behnken设计优化色谱条件，建立同时测定生物可降解纳米颗粒和人血浆中两种药物的方法，验证显示线性范围0.25–16?μg/mL，回收率91.85–106.53%，RSD<2.0%，LOD低至0.02?μg/mL(CAP)。该方法填补了CAP-CUR纳米制剂药效评价的技术空白，为肿瘤靶向治疗研发提供关键分析工具。

　　

在肿瘤治疗领域，卡培他滨(CAP)作为常用化疗药物与天然活性成分姜黄素(CUR)联用展现出显著协同效应，但两者联合给药系统的开发面临关键瓶颈——缺乏能同步监测药物稳定性及体内外行为的分析方法。传统HPLC方法存在灵敏度不足、流动相兼容性差等问题，而纳米制剂复杂的基质效应更增加了分析难度。这一技术缺口严重制约了CAP-CUR纳米递送系统的研发进程。

针对这一挑战，印度Adichunchangiri大学（ACU）药物科学系的研究团队创新性地将质量源于设计(QbD)理念引入分析方法开发，通过Box-Behnken实验设计(BBD)优化建立了革命性的反向高效液相色谱(RP-HPLC)技术。该研究突破性地实现了CAP与CUR在纳米制剂和生物基质中的同步精准检测，相关成果发表于《Journal of Chromatography B》。

研究团队采用三阶段技术路线：首先运用BBD设计系统考察流动相组成、流速等关键参数，通过方差分析(ANOVA)确定最佳色谱条件；随后按照ICH Q2 R1指南进行系统验证；最后将方法应用于纳米制剂加速稳定性测试和人血浆样本分析。核心技术包括：基于等吸收点(isosbestic point)的332?nm双波长同步检测、Shim-pack Solar C₁₈色谱柱分离、甲醇-0.1%磷酸(80:20)流动相体系。

材料与方法

研究采用Sigma-Aldrich提供的CAP(纯度95%)和ACU自研CUR，使用IR进行结构确证。关键创新点在于选择等吸收点波长解决双组分检测难题，并通过DoE优化使方法兼具高灵敏度(CAP的LOD 0.02?μg/mL)与抗干扰能力。

色谱条件优化

通过3D响应面分析确定最佳条件：流速1?mL/min，柱温25°C，检测波长332?nm。该方法使CAP与CUR的保留时间分别稳定在4.2和6.8分钟，理论塔板数>2000，分离度达4.5。与文献方法对比，本研究的LOD值降低10倍以上。

方法验证

线性范围0.25-16?μg/mL(R²>0.999)，日内/日间精密度RSD<2%。强制降解实验表明：酸性条件下CAP降解率15.3%，而CUR在光照条件下降解率达21.7%，证明方法能有效区分原药与降解产物。

结论

该研究创建的QbD驱动分析方法成功解决了CAP-CUR组合药物开发中的关键分析技术瓶颈。其创新性体现在：首次实现双组分同步检测、首次应用于纳米制剂稳定性评价、首次通过DoE确保方法稳健性。特别值得注意的是，方法在血浆样本中91.85-106.53%的回收率表现，为后续药代动力学研究奠定基础。研究人员Prasiddhi Naik等强调，这种"一次分析双指标"的策略将显著加速肿瘤靶向纳米药物的转化研究进程。

研究还揭示了CAP-CUR纳米系统的独特优势：在优化色谱条件下，即使经过加速稳定性试验，纳米载体中的药物仍保持94.2%以上的稳定性，这为开发基于生物可降解聚合物(如壳聚糖/Poloxamer P407)的下一代抗癌制剂提供了重要技术支撑。该成果不仅填补了分析方法空白，更通过QbD框架建立了可推广的药物分析开发范式，对推动组合药物精准医疗具有里程碑意义。