基于广谱抗PRRSV单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层检测方法的优化与应用研究

本研究针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测需求，开发了一种基于广谱单克隆抗体28F6的免疫过氧化物酶单层检测(IPMA)方法。研究人员通过优化反应条件，证实该方法可特异性识别多种PRRSV野毒株和疫苗株，检测限达10-2.25 TCID50/100μL，与qRT-PCR检测结果100%吻合，为PRRSV临床监测提供了可靠技术手段。

　　

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是困扰全球养猪业的重大疫病，其病原PRRSV具有惊人的变异能力，如同"变形金刚"般不断产生新的基因型。在中国，PRRSV-2型已演化出9个谱系，从早期的经典毒株BJ-4到2006年高致病性毒株JXA1，再到近年流行的NADC30-like毒株，病毒持续"改头换面"给防控带来巨大挑战。更棘手的是，现有疫苗株与野毒株的重组事件频发，使得实验室诊断如同在"移动靶标"上射击，亟需开发能识别多种变异株的广谱检测技术。

新乡大学生物工程学院联合河南省动物免疫学重点实验室的研究人员开展了一项创新研究，他们利用自主制备的广谱抗PRRSV单克隆抗体28F6，建立了一种高灵敏特异的免疫过氧化物酶单层检测(IPMA)方法。这项发表在《BMC Veterinary Research》的研究证实，该方法能同时检测包括BJ-4、HN07-1等野毒株和HuN4-F112、JXA1-R等7种疫苗株在内的10种PRRSV变异株，为PRRSV监测提供了"一网打尽"式的解决方案。

研究人员主要采用Western blot鉴定抗体靶点、病毒滴定确定检测限、条件优化实验确立最佳反应参数等技术路线。从河南省采集的108份临床样本验证了方法的可靠性。研究首先通过Western blot和质谱分析确认mAb 28F6特异性识别PRRSV保守的N蛋白，这解释了其广谱识别能力的分子基础。随后通过系统优化，确定病毒培养48小时、抗体稀释1:1.28×10⁴、显色10分钟等关键参数，使检测灵敏度达到10^-2.25 TCID₅₀/100μL，相当于感染3天后血液中的病毒载量水平。

在特异性验证部分，研究显示该方法与CSFV、PCV2和PEDV无交叉反应，不同批次抗体检测结果稳定。值得注意的是，该方法成功检测到中国流行的谱系1、5、8毒株，包括经典毒株CH-1a、高致病性毒株JXA1等。与qRT-PCR平行检测108份临床样本的完全一致性，证实了其临床应用价值。

该研究的突破性在于：首次建立基于N蛋白单抗的IPMA方法，克服了PRRSV高变异带来的检测难题；优化的检测限可覆盖感染早期和晚期的病毒载量；操作简便无需昂贵设备，适合基层实验室推广。正如讨论指出，该方法为PRRSV流行病学监测提供了标准化工具，尤其对鉴别疫苗株和野毒株具有重要价值。未来研究可进一步验证其在猪肺泡巨噬细胞培养系统中的应用效果，以提升临床毒株的分离率。这项技术或将改写PRRSV诊断格局，为全球PRRS防控贡献中国方案。