桃红四物汤通过调控NR4A1抑制脑缺血再灌注损伤中内皮细胞凋亡的机制研究

本研究针对脑缺血再灌注损伤（IRI）中内皮细胞（ECs）凋亡的临床难题，通过动物模型（MCAO/R）和细胞模型（OGD/R），结合分子对接与动力学模拟技术，首次揭示经典方剂桃红四物汤（THSWD）通过靶向核受体NR4A1-Mff-Drp1通路，抑制线粒体过度分裂（mitochondrial fission）和氧化应激（ROS），从而保护血脑屏障（BBB）完整性的作用机制。研究为缺血性卒中治疗提供了新靶点（NR4A1）和中药复方干预策略，成果发表于《Journal of Ethnopharmacology》。

　　

脑血管疾病是全球第二大死亡原因，其中缺血性卒中占比高达87%。尽管及时恢复血流可挽救组织，但再灌注过程常伴随血管内皮损伤和血脑屏障（BBB）破坏，这一现象称为缺血再灌注损伤（IRI）。安徽中医药大学的研究团队发现，脑微血管内皮细胞（BMECs）作为BBB的核心组分，其线粒体功能异常是IRI的关键环节——核受体NR4A1的过度激活会促进线粒体分裂因子（Mff）招募动力相关蛋白1（Drp1），导致线粒体过度分裂、活性氧（ROS）爆发和细胞凋亡。而临床常用活血方剂桃红四物汤（THSWD）虽对缺血性卒中有效，但其内皮保护机制尚未明确。

为破解这一难题，研究人员采用中动脉闭塞（MCAO/R）大鼠模型和氧糖剥夺/复氧（OGD/R）细胞模型，结合透射电镜观察线粒体形态、流式检测ROS、免疫荧光标记紧密连接蛋白（claudin-5/occludin）等技术，系统评估THSWD的神经保护作用。通过染色质免疫共沉淀（ChIP）和荧光素酶报告基因验证NR4A1与Mff启动子的结合活性，并运用分子对接筛选出THSWD中槲皮素（quercetin）和山奈酚（kaempferol）等与NR4A1高亲和力的活性成分。

THSWD减轻MCAO/R大鼠神经功能缺损和血管内皮损伤

Zea-Longa评分和TTC染色显示THSWD显著降低脑梗死体积；ELISA检测发现其能调节内皮素-1（ET-1）和一氧化氮合酶（eNOS）平衡，免疫荧光证实可修复紧密连接蛋白表达，提示BBB功能改善。

THSWD抑制线粒体分裂依赖性凋亡通路

透射电镜观察到THSWD组线粒体嵴结构完整，mPTP开放程度降低；WB和RT-qPCR显示NR4A1-Mff-Drp1通路表达下调，凋亡相关蛋白caspase9减少。分子机制研究表明NR4A1特异性结合Mff基因启动子R2区，而含THSWD血清可阻断这一激活作用。

活性成分与NR4A1的稳定结合

分子动力学模拟证实THSWD中的黄酮类成分能与NR4A1形成稳定复合物，为其靶向干预提供结构基础。

该研究首次阐明THSWD通过NR4A1-Mff-Drp1轴调控线粒体动力学，缓解氧化应激和内皮凋亡的创新机制。不仅为缺血性卒中治疗提供新靶点（NR4A1），还揭示了中药复方多成分协同作用的科学内涵。尤其值得注意的是，THSWD对mPTP和ROS的双重调控作用，可能为其他血管内皮损伤相关疾病（如动脉粥样硬化）提供跨界治疗思路。研究团队整合传统方剂与现代分子生物学技术的研究范式，为中医药现代化研究提供了典范。