基于NADP+生物传感器的新型P450酶实时检测技术开发与应用

为解决传统P450酶高通量检测方法在实时性和通用性方面的局限，研究人员开发了一种基于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)和双分子荧光互补技术的NADP+生物传感器。该传感器通过监测P450催化反应中NADPH向NADP+的转化动态，实现了1 μM-10 mM范围的线性检测，经气相色谱验证具有高可靠性，为P450酶研究提供了新型实时监测工具。

　　

在细胞色素P450酶(CYP450)研究领域，传统检测方法如比色法、质谱法和荧光法常受限于通量不足和实时监测困难。这项研究创新性地构建了基于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)与双分子荧光互补(BiFC)技术的NADP⁺生物传感器，巧妙利用P450酶催化过程中伴随的NADPH/NADP⁺转化这一关键代谢特征。研究人员通过基因敲除技术降低NADPH依赖性醛还原酶(YqhD)的表达，有效减少了细胞内源性NADP⁺合成的背景干扰。该传感器展现出1微摩尔至10毫摩尔的宽线性检测范围，其性能经气相色谱法交叉验证，证实能准确反映工程菌株中P450酶的活性变化。这项技术突破为药物代谢研究、环境毒理评估等需要实时监测P450酶活性的领域提供了强有力的新型研究工具。