嵌合型PR3单克隆抗体的开发及其在ANCA检测中作为标准化诊断参照物的应用研究

本研究针对PR3-ANCA检测缺乏标准化定量参照物的临床难题，开发了具有人类IgG1恒定区的小鼠源性嵌合抗体A07。通过哺乳动物细胞表达系统获得的高亲和力抗体，经ELISA、化学发光免疫分析(CLIA)等多平台验证，证实其能特异性识别PR3构象表位，为血管炎诊断提供了可替代血清的新型标准化参照物。

　　

在自身免疫疾病诊断领域，抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）检测犹如一把"双刃剑"——既是诊断肉芽肿性多血管炎（GPA）的金标准，又因缺乏标准化参照物而饱受结果可比性差的困扰。蛋白水解酶3（PR3）作为ANCA的主要靶抗原，其抗体检测的标准化进程面临特殊挑战：超过90%的PR3-ANCA识别的是三维构象表位，这意味着传统重组蛋白难以模拟天然抗原结构；而现行国际标准PR3-ANCA人参考血清#16（100 IU/mL）和欧盟ERM-DA483/IFCC标准品均依赖有限的人源血浆，存在批次差异大、供应短缺等瓶颈。更棘手的是，不同检测平台（如ELISA、化学发光等）间结果差异可达10倍以上，严重制约临床决策。

针对这一行业痛点，江苏大学附属医院联合深圳亚辉龙生物科技的研究团队在《Journal of Immunological Methods》发表创新成果。研究人员从PR3免疫小鼠的杂交瘤细胞中筛选出高亲和力单克隆抗体A07，通过基因工程手段将其可变区与人类IgG1恒定区拼接，构建出能模拟天然PR3-ANCA特性的嵌合抗体。这种"鼠头人身"的巧妙设计既保留了抗原结合特异性，又确保其Fc段能与人Fc受体正常互作。利用CHO细胞表达系统实现规模化生产，一举突破人源血清标准品的供应限制。

研究采用四大关键技术：通过避免变性的ELISA筛选保留构象表位识别能力的杂交瘤克隆；基于单细胞RNA测序获取抗体可变区序列；哺乳动物细胞表达系统生产嵌合抗体；多平台验证策略涵盖间接免疫荧光（IIF）、线性印迹、ELISA和化学发光免疫分析（CLIA）。研究队列包含10例经YHLO线性印迹产品确认的PR3-ANCA阳性GPA患者和3名健康对照血清。

【研究结果精要】

•抗体特性：嵌合A07仅结合非变性PR3，证实其构象表位依赖性，IIF显示典型胞浆型荧光模式（c-ANCA），效价达1:3200。

•多平台适用性：在ELISA和CLIA中均呈现优异的标准曲线（R²>0.99），检测下限达0.1 IU/mL，与IUIS-CDC参考血清相关性良好（r=0.92）。

•批间一致性：连续10批产品活性差异<5%，远优于血浆衍生品（15-20%变异）。

•临床符合率：在30例盲测样本中，与商品化试剂盒检测结果符合率达93.3%。

讨论部分深刻指出，这项突破有三重里程碑意义：其一，首次实现PR3-ANCA参照物的"去血清化"，通过CHO细胞工厂实现无限供应；其二，嵌合设计完美模拟天然PR3-ANCA的Fab-Fc协同作用，这在评估抗体介导的中性粒细胞活化实验中至关重要；其三，多平台验证策略为行业标准化提供模板。特别值得注意的是，A07抗体对PR3的构象表位识别特性，使其能够检测临床样本中90%以上的真实阳性，而传统线性表位抗体仅能识别40-60%病例。

该研究也存在局限：尚未在自动化仪器上验证性能；对PR3糖基化变体的识别谱有待完善。但毋庸置疑，这项成果为ANCA检测标准化提供了新范式，未来或可通过类似策略开发MPO-ANCA等其它自身抗体标准品，推动整个自身免疫诊断领域的质量升级。正如通讯作者Xingjuan Shi强调的："当每个实验室都能用同一把'尺子'测量ANCA，血管炎的早期诊断和治疗监测将迎来质的飞跃。"