干扰素诱导的免疫特征抑制猪细胞培养模型中HEV感染：登革热病毒神经侵袭机制与联合治疗策略

这篇研究创新性地建立了具有免疫活性的新生C57BL/6小鼠登革热病毒（DENV2）神经侵袭模型，揭示了病毒通过神经元感染引发脑炎、血小板减少等病理特征，并证实NS4B靶向药物JNJ-A07与TLR9激动剂CpG ODN的联合治疗可显著提升生存率。研究为登革热重症机制研究和"直接抗病毒药物（DAA）+宿主导向治疗（HDT）"策略提供了关键实验依据。

　　

ABSTRACT

登革热病毒（DENV）作为全球公共卫生威胁，其研究长期受限于缺乏具有临床症状的免疫活性动物模型。该研究通过建立新生C57BL/6小鼠感染模型，首次系统揭示了DENV2引发神经病理学改变的分子机制和治疗靶点。皮下接种3500 TCID₅₀ DENV2的新生小鼠表现出共济失调、癫痫发作等神经系统症状，并在8-13天内死亡。值得注意的是，该模型重现了人类登革热特征性病理改变——血小板减少和白细胞减少。

Introduction

登革热病毒属于黄病毒科，全球每年约3.9亿感染病例中，1/20会发展为伴有神经系统症状的重症登革热。研究团队突破性地发现：新生小鼠在出生后24小时内（P1）接种DENV2可建立致死性神经侵袭模型，而P5接种则产生抵抗力。这种年龄依赖性易感性为研究登革热重症化机制提供了独特窗口。

Results

神经侵袭特征

病毒载量分析显示，DENV2在感染后第6天（6 dpi）主要定植于大脑和眼睛，脑组织中病毒滴度达10⁵ TCID₅₀/mg。免疫荧光证实病毒特异性感染Fox2⁺神经元而非GFAP⁺星形胶质细胞，伴随小胶质细胞（Iba-1⁺）激活和CD45^high巨噬细胞浸润。Nanostring分析揭示脑组织出现干扰素相关基因（Ifnb1、Irf7）和颗粒酶（Gzmb）的显著上调，同时神经发育基因（Calb2、Olig2）表达受抑。

治疗策略评估

在抗病毒药物筛选中，靶向NS3-NS4B复合物形成的JNJ-A07（15 mg/kg）使生存率提升至80%，而靶向衣壳蛋白的ST-148无效。更有价值的是，TLR9激动剂CpG ODN 1555预处理可诱导100%保护，其机制依赖于I型干扰素（IFNβ）通路而非NK/T细胞。当3 mg/kg JNJ-A07与CpG ODN联用时，生存率产生协同效应达到100%。

机制解析

通过人PBMC实验发现，诱导I型干扰素的D型CpG ODN（非B细胞激活型K型）上清可抑制VERO E6细胞中病毒复制。在IFNβ敲除小鼠中，CpG ODN的保护作用几乎完全丧失，证实干扰素通路的核心地位。

Discussion

该研究建立的免疫活性模型填补了登革热研究领域的关键技术空白：

1. 首次在免疫完整动物中再现DENV2神经侵袭全过程

2. 揭示神经元特异性感染与神经炎症的基因特征谱

3. 验证"直接抗病毒+免疫调节"联合策略的协同效应

特别值得注意的是，模型虽未重现人类血管渗漏等外周症状，但其血小板减少特征与WHO重症诊断标准高度吻合。研究提出的CpG ODN通过IFNβ非依赖淋巴细胞途径发挥保护作用的发现，为开发广谱抗病毒策略提供了新思路。

Material and methods

技术体系包含三大创新模块：

1. 标准化感染模型：P1小鼠皮下接种3500 TCID₅₀ DENV2 NGC株

2. 多维评估：整合TCID₅₀、流式细胞术（CD45^high/CD45^low分群）和Nanostring免疫组学

3. 治疗验证平台：涵盖病毒靶向药（JNJ-A07/ST-148）和免疫调节剂（CpG ODN）单用/联用方案

该模型为登革热重症机制研究和治疗开发提供了不可替代的转化研究工具，其揭示的NS4B-干扰素轴协同作用机制，为应对四血清型DENV的广谱治疗策略奠定了实验基础。