非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及新型抗原表位鉴定为诊断技术提供新策略

非洲猪瘟（ASF）诊断面临严峻挑战，中国农业科学院等机构研究人员聚焦ASFV关键蛋白p30，成功制备3种特异性单抗，鉴定出169TIYGTPLKE177和111ETNECTSSFET121两个保守表位，并建立基于表位肽的间接ELISA检测技术，为ASFV早期诊断及疫苗设计提供重要工具。

　　

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的毁灭性动物传染病，其致死率可达100%。自2018年在中国暴发以来，该病毒已对全球养猪业造成巨大经济损失。由于ASFV复杂的免疫逃逸机制，目前尚无有效疫苗，早期快速诊断成为防控关键。ASFV的p30蛋白（又称p32）作为病毒早期表达的免疫优势抗原，在感染后8天即可诱导抗体产生，是诊断标志物的理想靶标。然而，现有诊断技术对p30抗原表位的认知不足，且缺乏高特异性检测工具。

针对这一难题，中国农业科学院的研究团队在《Molecular Immunology》发表重要成果。研究人员通过杂交瘤技术获得3株靶向p30蛋白的单克隆抗体（mAbs），首次解析出两个高度保守的线性表位，并开发出基于表位肽的间接ELISA检测体系。该研究不仅为ASFV诊断提供新工具，更揭示了p30蛋白的免疫识别特征。

关键技术包括：1）利用重组p30蛋白免疫BALB/c小鼠制备单抗；2）通过Western blotting和免疫荧光验证抗体特异性；3）采用肽扫描技术定位抗原表位；4）建立基于表位肽的间接ELISA方法。研究使用的ASFV毒株为基因型II（GenBank ON456300），实验涉及HEK-293T、MA104等多种细胞系。

主要研究结果

1. p30单抗制备与验证

   通过细胞融合技术获得3株能稳定分泌抗p30抗体的杂交瘤细胞株（2H3、3D11、4E2）。这些抗体在Western blotting中特异性识别35 kD重组p30蛋白，在免疫荧光中清晰显示ASFV感染细胞内的病毒颗粒分布。

2. 新型抗原表位鉴定

   运用肽库扫描发现两个未被报道的表位：位于C端的¹⁶⁹TIYGTPLKE¹⁷⁷和N端的¹¹¹ETNECTSSFET¹²¹。生物信息学分析显示，这两个表位在基因型I和II毒株中保守性达96%以上，解释了单抗的广谱反应性。

3. 诊断方法建立

   基于¹¹¹ETNECTSSFET¹²¹表位肽建立的间接ELISA，与商品化试剂盒相比，对临床血清样本的检测符合率达92.3%，且不与猪瘟病毒等病原体发生交叉反应。

研究意义

该成果首次系统揭示了p30蛋白的B细胞表位图谱，为理解ASFV免疫应答机制提供新视角。所开发的表位特异性ELISA技术，可有效区分疫苗接种与自然感染，解决了现有全蛋白检测法易出现假阳性的问题。 Jiang Sen等作者强调，鉴定出的保守表位为多价疫苗设计提供了关键靶点，而单抗3D11对表位¹⁶⁹TIYGTPLKE¹⁷⁷的中和活性提示其可能阻断病毒入侵，这为后续治疗性抗体开发奠定基础。研究获得国家重点研发计划（2021YFD1800105）和国家自然科学基金（32473040、32172867）支持，体现了我国在ASFV基础研究领域的领先地位。