迈向通用化快速复温方案：人类卵巢组织冷冻保存技术的突破性进展

为解决卵巢组织冷冻保存中复温方案不统一导致的临床实践难题，德国波恩大学医院团队开展了一项创新性研究，通过对比传统慢速解冻与新型快速复温方案对慢冻卵巢皮质的影响，发现采用含1M蔗糖的通用快速复温方案可显著提高原始卵泡保留率（52% vs 33%），同时维持血管内皮生长因子（VEGF-A）分泌水平和降低细胞凋亡（TUNEL检测p=0.014）。该研究为建立标准化卵巢组织处理流程提供了关键证据，对提升生育力保存成功率具有重要意义。

　　

在生殖医学领域，癌症治疗带来的生育力损伤已成为日益突出的临床挑战。随着肿瘤生存率的提升，年轻女性患者对治疗后生活质量尤其是生育能力的关注度显著增加。卵巢组织冷冻保存（OTC）作为重要的生育力保护手段，不仅能保存生殖潜能，还可维持内分泌功能，特别适用于需即刻化疗的青春期前女孩和高危癌症患者。然而当前OTC领域存在两大技术瓶颈：全球各中心采用的冷冻/复温方案差异显著，且传统慢速解冻过程耗时长达77分钟，可能导致卵泡激活和基质细胞损伤。

为攻克这一难题，德国波恩大学医院（University Hospital Bonn）生殖医学中心的研究团队创新性地提出"通用快速复温"概念，首次将原本用于玻璃化冷冻组织的快速复温方案应用于慢速冷冻的卵巢皮质组织。这项发表于《Reproductive BioMedicine Online》的研究通过25例患者配对样本的对照实验证实，采用含1M蔗糖的快速复温方案仅需16分钟即可完成处理，较传统方法缩短81%操作时间，同时获得更优的生物学指标。

研究团队运用多维度评价体系：通过钙黄绿素AM荧光染色定量活卵泡数，HE染色评估卵泡发育阶段分布，ELISA检测组织培养上清中VEGF-A浓度，TUNEL法测定细胞凋亡水平。所有样本均来自FertiPROTEKT网络转诊的癌症患者（年龄28±5.8岁，AMH 4.57±4.2 ng/mL），涵盖肉瘤、乳腺癌、淋巴瘤等多种适应症。

研究设计

采用配对样本对照模式，每位患者的卵巢皮质组织在慢速冷冻后，分别接受三种处理：传统梯度蔗糖解冻、"自制"快速复温液（GMOPS+培养基含1M蔗糖）、商品化快速复温试剂盒（VitaVitro HW1/HW2）。

卵泡活力

荧光显微镜计数显示，快速复温组活卵泡数（54.5±52.2）虽略高于传统组（44.5±29.7），但未达统计学差异（p=0.720）。值得注意的是，HE染色揭示快速复温显著保留原始卵泡比例（52-57% vs 33%，χ²检验p=0.0266），这对维持卵巢储备功能至关重要。

血管生成潜力

48小时缺氧培养后，传统组与自制快速复温组的VEGF-A分泌量显著高于商品化试剂组（p≤0.0001）。研究者认为适度的VEGF-A升高可能反映组织修复反应，但需结合凋亡数据综合评估。

细胞凋亡

TUNEL检测显示商品化快速复温组的DNA断裂信号强度（415 offset）显著低于传统组（p=0.014），提示该方案能更好维持细胞完整性。免疫荧光染色进一步证实PCNA阳性细胞在快速复温组织中分布更均匀。

这项研究开创性地证实：基于高浓度非渗透性冷冻保护剂（如蔗糖）的快速复温方案，可安全有效地应用于慢速冷冻卵巢组织，且与玻璃化冷冻组织的处理流程兼容。该突破不仅简化实验室操作流程（从77分钟缩短至16分钟），更解决了因商业试剂停产导致的供应链风险。研究团队特别指出，原始卵泡池的更好保留可能源于快速复温减轻了mTOR信号通路的异常激活，这对提高移植后长期功能至关重要。

当前研究的局限性在于样本量较小（n=25），且缺乏移植后的功能验证。未来需通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型或异种移植进一步确认其促血管生成能力。随着欧洲首例玻璃化卵巢组织移植婴儿的诞生（S?nger et al., 2024），这项为统一复温标准铺路的研究，或将成为推动生育力保存技术从实验室走向临床的关键转折点。