响尾蛇毒液多池稳定性评估及其对抗蛇毒血清生产的关键意义

【编辑推荐】本研究针对抗蛇尾蛇血清生产中毒液池成分变异问题，通过液相色谱、酶学及蛋白质组学技术，系统评估了巴西Crotalus durissus三批毒液池的稳定性。发现PLA2等关键毒素在4℃水溶液中可稳定60天，毒液池间虽存在酶活性差异但免疫反应性一致，为WHO提出的蛇咬伤防治战略提供了质量控制依据。

　　

在全球每年540万例蛇咬伤事件中，响尾蛇毒液引发的神经毒性、肌毒性和凝血功能障碍尤为凶险。世界卫生组织(WHO)将蛇咬伤列为重大公共卫生问题，而抗蛇毒血清的质量直接取决于免疫用毒液池的稳定性。巴西作为Crotalus durissus的主要分布区，其毒液中占70-90%的crotoxin（一种磷脂酶A₂）是引发致命症状的关键毒素，但毒液成分易受地理、饮食等因素影响，可能削弱血清效力。

针对这一难题，巴西Ezequiel Dias基金会（Funda??o Ezequiel Dias, FUNED）的研究团队在《Toxicon》发表研究，系统比较了2015、2018、2021三个年份采集的毒液池（分别含19、15、20条蛇的混合毒液）。通过液相色谱分离、酶活性检测（包括hyaluronidase和LAAO等）、Western blot免疫识别及蛋白质组学分析，结合60天4℃稳定性试验，揭示了毒液池的生物学特性。

关键技术包括：1）基于鸡蛋黄磷脂水解的PLA₂活性测定；2）纤维蛋白原溶解和凝血活性检测；3）液相色谱-质谱联用(LC-MS)蛋白质组分析；4）马抗血清免疫印迹评估。所有毒液样本均来自米纳斯吉拉斯州的野生蛇类，在FUNED蛇类饲养中心标准化采集。

【研究结果】

• 毒液成分差异：Pool 1在hyaluronidase和LAAO活性方面与Pool 2、3存在显著差异，后两者成分更均一

• 关键毒素稳定性：PLA₂在60天4℃水溶液中活性保持稳定（p>0.05），证实crotoxin的储存耐受性

• 免疫识别一致性：Western blot显示三批毒液的主要蛋白条带均能被抗血清识别，变异未影响抗原性

• 功能活性特征：所有毒池均保持 fibrinogenolytic（纤维蛋白原溶解）和促凝血活性，但Pool 1的 coagulant（促凝）效能略低

【结论与意义】

该研究首次证实：尽管不同年份采集的Crotalus durissus毒液存在定量差异，但主要毒素PLA₂的稳定性和免疫原性保持一致。这一发现为巴西国家卫生监督局(ANVISA)要求的毒液质量控制提供了实证支持，确保马匹免疫用毒液池的批间一致性。特别值得注意的是，crotoxin（PLA₂）和crotamine（肌坏死毒素）作为核心毒性成分，其稳定性直接关系到抗血清的中和效力。研究团队通过多组学联用策略建立的评估框架，为WHO提出的"2030年蛇咬伤减半"目标提供了关键技术支撑，同时为其他蛇种毒液标准化研究树立了范式。