基于冷冻保存与生殖细胞移植技术的香鱼(Sander lucioperca)种质资源保护方法研究

为解决陆封型香鱼(Plecoglossus altivelis)种质资源渗入对原生两栖种群遗传多样性的威胁，东京海洋大学团队通过冷冻保存20周龄供体睾丸中的A型精原细胞(ASGs)，并移植至8-10日龄受体幼虫生殖嵴(移植成功率86.6±1.7%)，成功获得功能性配子。该研究首次在胡瓜鱼目建立冷冻生殖细胞-移植-活体再生技术体系，为保护两栖型香鱼遗传资源提供创新方案。

　　

在日本河流生态系统中，香鱼(Plecoglossus altivelis)作为重要的游钓鱼种，其陆封型与两栖型种群间存在显著的生殖特性差异。令人担忧的是，持续百年的增殖放流计划导致陆封型香鱼基因向原生两栖种群渗入，最新微卫星分析显示这种遗传混合已广泛存在于日本多条河流。面对这一严峻形势，东京海洋大学的研究团队在《Aquaculture》发表突破性研究，通过冷冻保存联合生殖细胞移植技术，首次实现胡瓜鱼目鱼类的种质资源冷冻再生。

研究采用三大关键技术：组织学筛选20周龄供体睾丸中富集的A型精原细胞(ASGs)；优化慢速冷冻方案保存睾丸细胞；将PKH26标记的冷冻细胞移植至8-10日龄两栖型香鱼幼虫腹腔。通过建立三倍体受体体系，有效阻断受体遗传物质传递。

【Identification of suitable donor ages】组织学分析显示20周龄供体睾丸含最多ASGs(直径7.8μm)，24周龄后出现明显分化。

【Development of genital ridge】16日龄幼虫生殖嵴已完全被体细胞层覆盖，确定8-10日龄为最佳移植窗口期。

【Germ cell transplantation】冷冻ASGs在86.6±1.7%的受体中成功定植，三倍体受体产生纯供体型配子比例达20%。

【Offspring production】微卫星证实19例二倍体雄性中15例、12例雌性中9例产生供体配子，通过人工授精获得遗传背景纯净的子代。

该研究突破性地解决了三个关键问题：建立胡瓜鱼目首例生殖细胞冷冻保存技术；验证三倍体受体产生纯供体配子的可行性；开发出可商业化应用的香鱼种质资源库构建方案。尤为重要的是，通过移植后配子发生效率量化分析(二倍体受体78.9% vs 三倍体受体20%)，为不同保育目标下的技术选择提供数据支撑。这项技术不仅可应用于濒危香鱼种群保护，其建立的16日龄生殖嵴发育模型更为其它经济鱼类的生殖调控研究提供重要参照。