苦杏仁（Prunus amygdalus var. amara）种子提取物增强米替福新抗利什曼活性的机制研究

本研究针对利什曼病治疗中传统药物成本高、毒性大及耐药性等问题，探索了苦杏仁（EPA）种子提取物的抗利什曼活性及其与米替福新（Miltefosine）的协同效应。通过体外实验证实，EPA可剂量依赖性抑制利什曼原虫前鞭毛体（IC50=43.12±3.03μg/ml）和胞内无鞭毛体（IC50=49.65±3.34μg/ml），联合米替福新后活性显著增强（IC50分别降至4.547±1.2μg/ml和19.54±2.4μg/ml）。GC-MS分析首次鉴定出EPA中含有的抗微生物活性成分（如环戊烯十一烷酸甲酯、大风子酸等），并通过上调LdMetacaspase和LdPARP1基因表达诱导寄生虫凋亡。该研究为开发低毒、高效的植物源抗利什曼联合疗法提供了新思路。

　　

利什曼病作为一种由利什曼原虫（Leishmania spp.）感染引起的热带寄生虫病，每年导致全球近百万人感染，现有治疗方案面临耐药性、高毒性和经济负担等严峻挑战。米替福新等一线药物虽有效，但单独使用易引发不良反应且价格昂贵。在此背景下，植物源天然产物的开发成为突破治疗瓶颈的重要方向。

贾米亚米利亚伊斯兰大学（Jamia Millia Islamia）的研究团队聚焦传统药用植物苦杏仁（Prunus amygdalus var. amara），系统评估了其种子提取物（EPA）的抗利什曼活性。研究人员通过体外实验模型结合分子生物学技术，首次揭示了EPA通过双重机制发挥作用：直接抑制寄生虫生长并激活其凋亡通路，同时与米替福新产生显著协同效应。相关成果发表于《BMC Complementary Medicine and Therapies》，为开发基于植物活性成分的联合疗法提供了实验依据。

研究采用四项关键技术：1）前鞭毛体/无鞭毛体抑制实验测定IC₅₀；2）MTT法评估THP-1巨噬细胞毒性；3）RT-PCR/qRT-PCR检测凋亡相关基因（LdMetacaspase、LdPARP1）；4）GC-MS鉴定EPA活性成分。

抗前鞭毛体活性

EPA单独处理72小时可使前鞭毛体数量呈剂量依赖性下降（45-405μg/ml），IC₅₀为43.12±3.03μg/ml。与2μg/ml米替福新联用后，45μg/ml EPA即可实现近100%抑制，IC₅₀降至4.547±1.2μg/ml（图1B-D）。

细胞安全性验证

MTT实验显示EPA对THP-1巨噬细胞的CC₅₀高达799.19±134.59μg/ml，联合组CC₅₀为384.16±177.47μg/ml（图2），证实其治疗窗口广阔。

抗无鞭毛体效应

感染模型证实EPA（45-250μg/ml）可减少巨噬细胞内寄生虫负荷，联合米替福新后IC₅₀从49.65±3.34μg/ml降至19.54±2.4μg/ml（图3）。吉姆萨染色显示135μg/ml EPA+米替福新组无鞭毛体几乎完全清除（图4F）。

凋亡机制解析

基因表达分析表明，EPA+米替福新组LdMetacaspase和LdPARP1表达显著上调（图5），提示通过激活半胱氨酸蛋白酶家族和DNA修复酶诱导程序性死亡。

活性成分鉴定

GC-MS从EPA中鉴定出13种化合物（表1），其中大风子酸（68.17%）和环戊烯十一烷酸甲酯（7.72%）可能为关键活性成分，二者此前已被报道具有抗分枝杆菌活性。

该研究创新性发现EPA可通过多靶点作用抑制利什曼原虫，其与米替福新的协同效应尤为突出：联合用药组对前鞭毛体的抑制效率提升近10倍，且细胞毒性可控。从传统药用植物中发掘的活性成分（如大风子酸衍生物）为抗寄生虫药物研发提供了新化学骨架，而凋亡通路的激活机制为后续靶向治疗策略设计提供了理论依据。这项成果不仅为开发低成本、低毒性的联合疗法奠定基础，也为其他热带寄生虫病的植物药研究提供了方法论参考。