用于新型外用制剂中环丙沙星、姜黄素和胡椒碱同时定量分析的稳定性指示RP-HPLC方法开发与验证

《Microchemical Journal》：Stability-indicating RP-HPLC method development and validation for simultaneous quantification of ciprofloxacin, curcumin, and PIPERINE in a novel topical dosage form

环丙沙星、姜黄素和哌啶的稳定性指示RP-HPLC同步测定方法研究，优化流动相为乙腈-正磷酸（70:30, v/v），流速1 mL/min，检测波长278 nm，柱温30℃，通过酸碱水解、热、光及氧化降解实验验证方法稳定性，线性范围宽（相关系数均＞0.995），符合ICH Q2(R1)规范，适用于新型贴剂制剂的质量控制。

　　

摘要

本文成功开发了一种优化的稳定性指示反向相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，用于同时估算和定量环丙沙星（Ciprofloxacin）、姜黄素（Curcumin）和胡椒碱（Piperine）的含量。该方法基于科学原理进行了策略性优化，以确保其稳健性。根据监管指南对方法进行了验证，以确认其可靠性和有效性。分析条件下的运行时间极短，仅需7分钟，采用等度洗脱方式，流动相为乙腈：正磷酸（70:30 v/v），流速为1 mL/min。色谱检测时使用最佳波长278 nm。色谱柱的温度始终控制在30°C，以保证在整个色谱过程中获得稳定的响应。此外，还对选定的药物候选物在热、光解、氧化和酸碱诱导等应力条件下进行了多种强制降解研究。应力测试后，样品经过HPLC分析，证明了该方法能够有效区分目标分析物和降解产物。所设计的分析技术随后根据ICH指南Q2(R1)进行了验证，并对线性、系统适用性、准确性、精确度、稳健性、灵敏度和溶液稳定性等关键性能指标进行了全面评估。结果表明，该方法在新型外用剂型中定量环丙沙星、姜黄素和胡椒碱具有可靠性和高精度。

章节摘录

引言

1–3

分析方法的开发和验证对于确保药品中分析物的身份、纯度、效力和安全性至关重要。随着固定剂量组合和多组分药物制剂的复杂性不断增加，对能够同时估算多种活性药物成分（APIs）的准确、精确和快速分析技术的需求也日益增强。此类方法不仅对于常规分析至关重要

化学品和试剂

本研究使用的API包括：从Mumbai的Godavari Drugs Ltd.购买的纯度为99%的环丙沙星；从Mumbai的Yucca Enterprises购买的纯度为95%的姜黄素和胡椒碱。所用试剂均为HPLC级（AR）。所有精密分析工作均采用高效液相色谱（HPLC，LC 2030 Shimadzu）完成，这是一种先进且精确的色谱技术，可确保分析结果的准确性和重复性。

方法的验证：

根据ICH指南Q2(R1)中的规定，对所开发的HPLC方法进行了验证。

热降解

将定量后的药物称量并转移到瓷盘中，然后用铝箔包裹。同时制备了三种药物的混合标准品，并将其加热至60°C持续4小时，随后在室温下冷却，再使用HPLC进行分析。

酸性和碱性水解

将混合标准品分别加入0.1 N HCl和0.1 N NaOH进行酸性和碱性水解处理，然后在室温下保持2小时，之后进行中和。

配方乳膏的分析：

制备好的样品溶液的工作浓度为20 ppm，用于定量分析。随后通过HPLC对其精确浓度进行测定，所得色谱数据见表11。

结果与讨论

在紫外光谱仪（Shimadzu 1300）上对标准溶液的工作浓度进行了分析（波长范围200至800 nm），发现三种药物在278 nm波长处均表现出良好的吸光度。因此选择278 nm作为后续分析的波长。

结论

成功开发了一种新型的稳定性指示反向相HPLC方法，可用于新型外用剂型中环丙沙星、姜黄素和胡椒碱的同时定量分析。该方法在整个分析范围内表现出出色的线性，相关系数（r2）分别为：环丙沙星0.9957，姜黄素0.9974，胡椒碱0.9980，这证明了该方法适用于定量分析。该方法在日内和日间重复性方面也表现良好。

CRediT作者贡献声明

Alexlivingston Nadar：负责撰写初稿、方法验证和数据整理。Vandana Jain：负责监督、研究设计和概念构思。Melroy D’Sa：负责撰写、编辑和正式数据分析。

出版同意

作为作者，我们共同同意发表该手稿。

资金支持

作为作者，我们声明在研究工作及手稿撰写过程中未收到任何资金支持。

未引用的参考文献

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利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本文研究工作的已知财务利益或个人关系。

致谢

作者感谢OES位于Navi Mumbai的Sanpada地区的东方药学院在研究项目期间提供的持续支持。