三特异性SEED抗体工程化改造：中性粒细胞介导的肿瘤细胞杀伤新策略

这篇研究报道了基于链交换工程域（SEED）技术构建的三特异性IgA抗体，通过理性突变成功赋予其结合CD89（FcαRI）的能力，同时保留对EGFR和ROR1的双靶向特性。该抗体能有效介导肿瘤细胞-效应细胞簇形成，并激发中性粒细胞（PMNs）的杀伤活性，为克服T细胞疗法局限性提供了新思路。

　　

分子设计创新

研究团队开创性地将链交换工程域（SEED）技术应用于IgA抗体构建。这种异源二聚体技术通过在C_H3结构域中交织IgA和IgG序列片段，实现了稳定的双特异性抗体架构。针对抗EGFR的Fab 225和抗ROR1的scFv H082分别与IgA C_H1、铰链区和C_H2结构域融合，形成独特的SEED GA和AG链组合。通过同源建模分析CD89（PDB:1OW0）与IgA-Fc的相互作用界面，研究者精准定位了9个关键残基进行突变改造，成功恢复了被SEED技术破坏的CD89结合能力。

结构优化突破

在SEED GA链中，研究者将H93_N94_H95_Y96序列逆转为天然IgA的P93_L94_A95_F96关键结合基序。同时引入S86M突变，该位点丙氨酸突变曾报道会使CD89结合活性降低100倍。AG链额外引入G45S和P47E突变以稳定与CD89中L54的相互作用。C末端去除C和Y残基有效避免了多聚化问题。在IgA2支架中，通过P221R突变增强了轻-重链相互作用稳定性。这些改造使抗体保持65°C和75°C的双重热稳定性，与亲本SEED分子相当。

糖基化特征解析

研究首次系统分析了SEED-IgA的糖基化特征。在N263位点（Site II），改造后的MUT2724-IgA1核心岩藻糖基化比例（6.86%）显著低于未改造SEED（71.24%），更接近野生型IgA1（1.81%）。C_H3末端N459位点（Site IV）在AG链中约50%未糖基化，而GA链仅15-20%未修饰。这种差异化的糖型分布可能与FUT8酶对空间构象的敏感性相关，同时也影响着CD89的结合活性。

功能验证成果

改造后的三特异性抗体展现出57nM的CD89亲和力，与野生型IgA（27nM）相当。在细胞实验中，能同时结合EGFR⁺/ROR1⁺的MDA-MB-468肿瘤细胞和CD89⁺的HL-60细胞（模拟中性粒细胞），形成30%的细胞簇，与阳性对照相当。最令人振奋的是，在20nM浓度下可诱导21%的肿瘤细胞特异性裂解。IgA2支架的改造体同样有效，证实了平台的普适性。内部化实验显示三特异性抗体进入肿瘤细胞的速度（42%/4h）快于亲本抗体（32%），这可能增强其治疗效果。

治疗前景展望

该研究突破了传统IgG类抗体的局限，开创性地将SEED技术、IgA效应功能和中性粒细胞杀伤机制相结合。相比现有的Trisomab格式，新构建体具有更优的肿瘤靶向选择性；相较于Heinkel报道的异源二聚体IgA，其独特的糖基化特征和结构域互作提供了差异化的功能调控空间。未来通过融合白蛋白结合域或全人源血清白蛋白，有望解决IgA半衰期短的瓶颈。这种能同时动员先天免疫（中性粒细胞）和适应性免疫（通过EGFR/ROR1靶向）的多功能平台，为实体瘤和血液肿瘤治疗提供了新范式。