胃蛋白酶水解卵类粘蛋白通过MAPK/NF-κB通路激活RAW 264.7巨噬细胞免疫活性的机制研究

研究人员针对免疫调节功能肽开发需求，通过胃蛋白酶水解卵类粘蛋白(OVM)获得活性肽段(OMPH)，发现其能显著激活RAW 264.7巨噬细胞的MAPK/NF-κB信号通路，上调TNF-α、IL-6等细胞因子表达，鉴定出关键免疫活性肽EGKDVLVCNK，为功能性食品开发提供新思路。

　　

在免疫健康领域，如何从天然食物蛋白中获取安全有效的免疫调节成分一直是研究热点。卵类粘蛋白(OVM)作为鸡蛋清中的重要糖蛋白，其生物活性肽的开发潜力尚未充分挖掘。韩国食品研究院（Korea Institute of Planning and Evaluation for Technology in Food, Agriculture and Forestry）的研究团队在《Enzyme and Microbial Technology》发表的研究，系统揭示了胃蛋白酶水解OVM产生的活性肽段(OMPH)对巨噬细胞免疫活性的调控机制。

研究采用SDS-PAGE电泳、LC-MS/MS质谱分析等技术，结合RAW 264.7巨噬细胞模型，通过Griess法检测一氧化氮(NO)产量，qRT-PCR分析细胞因子mRNA表达，Western blot检测MAPK/NF-κB通路蛋白磷酸化水平，并观察细胞形态学变化。

Abstract部分
研究证实OMPH含有10-20 kDa特征肽段，在500 μg/mL浓度下保持80%以上细胞存活率。相比其他酶解产物，OMPH显著提升NO产量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达，且呈剂量依赖性。

Introduction部分
阐明巨噬细胞通过MAPK/NF-κB通路调控免疫反应的分子机制，指出OVM因其特殊的二硫键结构和热稳定性成为理想的前体蛋白。

Materials and methods部分
使用四种蛋白酶（胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶）制备水解产物，通过MTT法评估细胞毒性，ELISA检测细胞因子分泌，并采用LC-MS/MS鉴定活性肽序列。

Results部分
关键发现包括：1）OMPH特异性激活ERK和IκB-α磷酸化；2）显著上调TNF-α和IL-6基因表达3-5倍；3）诱导巨噬细胞呈现树突状形态改变；4）从OMPH中分离出9种肽段，其中EGKDVLVCNK显示最强免疫活性。

Conclusion部分
研究证实OMPH通过双重调控MAPK（特别是ERK亚型）和NF-κB信号通路激活巨噬细胞，其活性肽EGKDVLVCNK可作为功能性食品添加剂或免疫调节药物开发的候选分子。该成果为鸡蛋副产物高值化利用提供了理论依据和技术路径。