胃蛋白酶水解卵类黏蛋白通过MAPK/NF-κB通路激活RAW 264.7巨噬细胞免疫活性的机制研究

本研究针对免疫调节功能肽开发需求，通过胃蛋白酶水解卵类黏蛋白(OVM)获得活性肽段(OMPH)，证实其通过激活MAPK/NF-κB信号通路显著提升RAW 264.7巨噬细胞的NO、TNF-α和IL-6分泌水平，鉴定出关键免疫活性肽EGKDVLVCNK，为功能性食品和药物研发提供新思路。

　　

免疫系统是人体的重要防御屏障，而免疫功能低下人群如老年人和婴幼儿易受疾病侵袭。卵类黏蛋白(OVM)作为鸡蛋清中富含的糖蛋白，其生物活性肽的开发备受关注。目前关于OVM水解产物的免疫调节机制研究仍存在空白，特别是其通过何种信号通路发挥作用尚不明确。

韩国食品评估研究院(Korea Institute of Planning and Evaluation for Technology in Food, Agriculture, and Forestry)的研究团队在《Enzyme and Microbial Technology》发表研究，系统比较了菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶四种酶解OVM产物的免疫活性。研究发现胃蛋白酶水解产物(OMPH)能显著激活巨噬细胞，通过LC-MS/MS技术鉴定出9种活性肽段，其中EGKDVLVCNK肽段展现出突出的免疫调节功能。

研究采用SDS-PAGE分析分子量分布、Griess法检测NO产量、qRT-PCR定量细胞因子mRNA表达、Western blot分析信号通路蛋白磷酸化水平等关键技术。通过细胞形态学观察和吞噬功能实验验证了OMPH对巨噬细胞的激活作用。

【Hydrolysis of OVM】部分显示，OMPH产生10-20 kDa特征肽段，在500 μg/mL浓度下保持80%以上细胞存活率。

【免疫活性评估】结果表明，OMPH处理组NO产量显著提高2.3倍，iNOS mRNA表达呈剂量依赖性上调，TNF-α和IL-6分泌量分别增加3.1倍和2.8倍。

【信号通路机制】研究发现OMPH特异性激活MAPK通路中的ERK、JNK和p38磷酸化，同时促进NF-κB通路关键蛋白IκB-α和p65的磷酸化，其中ERK和IκB-α磷酸化水平尤为显著。

【细胞形态变化】观察到OMPH处理的巨噬细胞呈现典型的树突状活化形态，细胞体积增大40%以上。

【肽段鉴定】通过LC-MS/MS从OMPH中分离出9种肽段，分子对接模拟显示EGKDVLVCNK与TLR4受体有强结合能力。

该研究首次阐明OVM胃蛋白酶水解产物通过双重激活MAPK/NF-κB信号通路发挥免疫增强作用，为开发新型免疫调节剂提供了理论依据。鉴定出的特征肽段EGKDVLVCNK具有成为功能性食品添加剂或免疫佐剂的潜力。研究团队建议后续开展动物实验验证其体内免疫活性，并探索工业化生产的可行性。该成果对特殊营养食品开发和免疫相关疾病防治具有重要指导价值。