MIR4726EccDNA通过MIR4726-5p/NXF1/NKIRAS2轴依赖的自噬驱动多发性骨髓瘤硼替佐米耐药机制研究

本研究针对多发性骨髓瘤(MM)硼替佐米耐药难题，首次揭示了染色体外环状DNA(MIR4726EccDNA)通过上调MIR4726-5p靶向核输出因子NXF1，导致NF-κB抑制因子NKIRAS2核滞留减少，进而激活NF-κB通路并增强自噬的耐药机制。该发现为克服MM耐药提供了新靶点，发表于《Cell Communication and Signaling》。

　　

多发性骨髓瘤(MM)作为第二常见的血液系统恶性肿瘤，尽管蛋白酶体抑制剂硼替佐米等新药不断涌现，但耐药复发仍是临床面临的重大挑战。尤其令人关注的是，17号染色体短臂缺失(del(17p))患者预后极差，其耐药机制尚未阐明。近年来，染色体外环状DNA(EccDNA)因其不受染色体结构限制的高效转录特性，在肿瘤耐药中的作用逐渐受到重视。

中南大学湘雅三医院血液科的研究团队通过circle-seq和mRNA-seq技术，在3例完全缓解后复发的MM患者中鉴定出一个位于17q12的136bp环状DNA分子(MIR4726^EccDNA)。该分子在del(17p)复发患者中特异性存在，携带MIR4726前体miRNA基因。研究人员通过构建体外和体内模型，系统揭示了MIR4726^EccDNA-MIR4726-5p-NXF1-NKIRAS2信号轴通过调控自噬介导耐药的分子机制，为MM精准治疗提供了新策略。

关键技术方法包括：对3例配对样本进行EccDNA全基因组测序(circle-seq)和转录组分析(mRNA-seq)；通过体外合成EccDNA转染MM细胞系验证功能；采用荧光原位杂交(FISH)检测del(17p)；通过双荧光素酶报告系统验证miRNA-mRNA互作；建立NOD-SCID小鼠移植瘤模型进行体内验证。

MIR4726^EccDNA驱动MM细胞硼替佐米耐药
通过外引物PCR和Sanger测序验证了MIR4726^EccDNA的环状结构。转染人工合成的MIR4726^EccDNA可使NCI-H929和RPMI 8226细胞的IC₅₀值显著升高，凋亡率下降（图1G-I）。临床样本分析显示，MIR4726-5p在del(17p)复发患者中表达最高（图2A）。

MIR4726-5p通过靶向NXF1介导耐药
转录组分析发现核输出因子NXF1在复发MM中低表达（图3A）。MIR4726-5p可通过非经典途径下调NXF1表达（图3C-D）。沉默NXF1能增强细胞耐药性（图3E-F），而过表达NXF1可逆转MIR4726-5p抑制剂的作用（图3I-J）。

NXF1调控NKIRAS2核质分布
NXF1与NKIRAS2表达呈正相关（图4A）。NXF1缺失导致NKIRAS2核滞留增加、胞质表达减少（图4D），激活NF-κB通路（p-p65/p65升高）并促进LC3II/LC3I转换（图5A）。电镜观察到siNKIRAS2组自噬体显著增多（图5B）。

体内验证治疗潜力
小鼠移植瘤实验显示，瘤内注射AgoMIR4726-5p可促进肿瘤生长并减弱硼替佐米疗效（图6B-D）。免疫组化证实处理组Ki67、p-p65和LC3B表达升高，cleaved caspase3降低（图6E）。

该研究首次阐明EccDNA通过miRNA-mRNA调控网络介导MM耐药的完整机制：MIR4726^EccDNA→MIR4726-5p↑→NXF1↓→NKIRAS2核滞留↓→NF-κB激活→自噬增强→硼替佐米耐药（图7）。不仅为del(17p)患者不良预后提供了分子解释，更提示靶向MIR4726-5p/NXF1/NKIRAS2轴或联合自噬抑制剂可能是克服耐药的新策略。研究创新性地将EccDNA功能研究与肿瘤微环境调控相结合，为MM精准治疗开辟了新视角。