基于制备型HPLC-定量1H NMR与单标多测（QAMS）联用技术快速分析木豆中芪类成分

为解决木豆(Cajanus cajan)中芪类成分缺乏商业标准品导致的定量难题，研究人员创新性整合制备型HPLC、定量1H NMR与单标多测（QAMS）技术，成功建立PME、LLC和CSA三种芪类成分同步定量方法。该方法通过制备纯化化合物并经NMR绝对定量，确定相对校正因子（RCFs），验证结果与传统外标法无显著差异，为天然产物质量控制提供经济高效的新策略。

　　

木豆（Cajanus cajan）作为热带地区重要的药用豆科植物，其叶片中富含具有抗氧化、抗菌活性的芪类化合物，如羽扇豆芪醇C（LLC）、紫檀芪单甲醚（PME）和木豆芪酸（CSA）。然而这些活性成分的商业标准品价格昂贵且纯度存疑，严重制约了木豆药用价值的开发。传统多组分定量需要多种标准品，而单标多测（Quantitative Analysis of Multi-components by Single Marker, QAMS）技术虽能降低成本，却因缺乏准确测定相对校正因子（Relative Correction Factors, RCFs）的参考物质而难以推广。

浙江树人大学（Zhejiang Shuren University）联合浙江海正药业的研究团队在《Journal of Chromatography A》发表研究，开创性地将制备型高效液相色谱（Preparative HPLC）、定量核磁共振（quantitative ¹H NMR）与QAMS技术整合，建立了木豆芪类成分的高效分析平台。研究人员首先通过制备型HPLC从木豆叶片中分离出PME、LLC和CSA三种芪类单体，采用以1,3,5-三甲氧基苯（TMB）为内标的定量¹H NMR技术完成绝对定量，进而以白藜芦醇为参照物测定RCFs，最终构建了仅需单一标准品即可同步定量多组分的QAMS方法。

关键技术方法
研究采用甲醇提取木豆各部位（叶、嫩茎、根等）芪类成分，通过制备型HPLC分离纯化目标化合物；利用600 MHz NMR仪，以DMSO-d₆为溶剂、TMB为内标进行定量¹H NMR分析；建立UPLC-PDA检测条件（ACN-0.1%甲酸水梯度洗脱），验证QAMS方法的精密度、稳定性和重复性。

主要研究结果

1. 芪类化合物的分离与鉴定
   甲醇提取物经制备型HPLC成功分离出PME（保留时间12.3 min）、LLC（14.7 min）和CSA（16.1 min），经质谱和NMR确证结构，纯度均>98%。

2. 定量¹H NMR验证
   建立的NMR定量法线性优异（r²>0.999），检测限（LOD）为0.104-0.315 mg/mL，定量限（LOQ）为0.315-0.956 mg/mL，日内/日间精密度RSD<2%。

3. QAMS方法建立
   以白藜芦醇为参照，测得PME、LLC、CSA的RCFs分别为1.044、2.123和2.341（RSD<1.64%），方法学验证显示与常规外标法无统计学差异（p>0.05）。

4. 木豆不同部位芪类分布
   叶片中总芪含量最高（1.96%），显著高于嫩茎（0.43%）、成熟茎（0.08%）和根（0.01%），为资源利用提供科学依据。

研究意义
该研究首次将制备型HPLC纯化、定量NMR绝对定值与QAMS技术有机结合，突破了天然产物分析中标准品短缺的瓶颈。所建立的RCFs数据库可实现实验室间数据可比性，为木豆质量标准的制定奠定基础。更值得关注的是，该策略可推广至其他植物活性成分分析，尤其适用于结构复杂、标准品稀缺的天然产物体系，对促进中药现代化和天然药物开发具有重要实践价值。