结直肠癌肿瘤微环境空间解析免疫评分新策略：CD8IE-FOXP3IS双靶标预后模型的建立与验证

为解决结直肠癌（CRC）传统免疫评分（如Immunoscore?）未区分肿瘤区域特异性免疫细胞分布的问题，研究人员通过三重免疫组化技术开发了CD8IE-FOXP3IS评分系统。该研究在1724例患者队列中证实，整合上皮内CD8+与间质FOXP3+T细胞密度的新评分可独立预测生存（Cohort 1 HR=3.08，ptrend=6.0E-4），且优于传统CD3-CD8评分，为CRC精准免疫预后提供新工具。

　　

研究背景与意义
结直肠癌（CRC）作为全球第三大高发恶性肿瘤，其预后评估长期依赖TNM分期系统。尽管免疫细胞浸润程度已被证实与患者生存密切相关，但现有免疫评分方法如Immunoscore?仅关注CD3⁺和CD8⁺T细胞整体密度，忽略了这些细胞在肿瘤不同功能区域的分布差异。近年研究发现，上皮内（intraepithelial, IE）的CD8⁺细胞与间质（intrastromal, IS）的FOXP3⁺调节性T细胞可能具有更精准的预后价值，但缺乏标准化检测方案和独立验证。

研究设计与方法
Oulu University Hospital（芬兰奥卢大学医院）的研究团队开发了一种基于三重显色免疫组化（IHC）的创新检测技术，结合数字病理与机器学习算法，在1724例CRC患者（Cohort 1:746例；Cohort 2:978例）中量化CD8^IE和FOXP3^IS密度。研究采用组织微阵列（TMA）技术，通过Leica Bond RX自动化染色平台依次标记CD8（红色）、FOXP3（棕色）和细胞角蛋白（绿色），利用开源软件QuPath进行空间分辨的细胞分类与密度计算。

关键结果

1. CD8^IE-FOXP3^IS评分与临床特征关联
   低评分组显著富集于晚期分期（IV期占比Cohort 1达33%）、淋巴血管侵犯（p<2.2E-8）和MMR正常型肿瘤，且与高龄相关（p=0.035）。

2. 预后效能验证
   多变量Cox回归显示，低CD8^IE-FOXP3^IS评分是独立预后因素（Cohort 1 HR=3.08, 95%CI 1.54-6.15；Cohort 2 HR=4.30, 95%CI 2.58-7.17），其预测效力显著优于CD3-CD8密度评分（后者在多变量模型中无统计学意义）。

3. 空间分布特异性分析
   CD8⁺细胞在上皮内的密度比间质或整体密度更具预后区分度，而FOXP3⁺细胞的预后价值存在队列异质性，提示微环境空间解析的必要性。

结论与展望
该研究建立的CD8^IE-FOXP3^IS评分首次通过常规病理技术实现了肿瘤微环境免疫细胞的空间解析量化，其三大创新点在于：

1. 技术可及性：采用广泛配置的自动化IHC平台，避免依赖昂贵荧光设备；
2. 算法开放性：基于QuPath开源软件的分析流程便于推广；
3. 临床实用性：在调整TNM分期等混杂因素后仍保持预测稳健性。

论文发表于《Laboratory Investigation》，为CRC免疫预后提供了超越传统Immunoscore?的新范式，未来或可指导免疫治疗获益人群筛选。研究局限性包括TMA取样偏差和未纳入其他免疫细胞亚群（如髓系细胞）的分析，这为后续研究指明了优化方向。