综述：骨与软组织肉瘤液体活检研究进展

这篇综述系统阐述了液体活检（Liquid Biopsy）技术在骨与软组织肉瘤（Bone and Soft-tissue Sarcomas）中的最新进展，重点探讨了循环肿瘤细胞（CTCs）、循环肿瘤DNA（ctDNA）、循环microRNA及细胞外囊泡（EVs）在早期诊断、预后评估和治疗监测中的应用潜力，为个性化治疗提供了分子层面的新策略。

　　

骨与软组织肉瘤液体活检的突破与挑战

引言：肉瘤诊疗现状
骨与软组织肉瘤是一组起源于间叶组织的恶性肿瘤，占成人实体瘤的1%和儿童实体瘤的20%。尽管手术联合放化疗是主要治疗手段，但患者仍面临高复发和转移风险，尤其是肺转移预后极差。传统影像学监测存在局限性，而液体活检通过分析血液等体液中的肿瘤衍生分子（如CTCs、ctDNA、miRNA和EVs），为实时监测和精准诊疗开辟了新途径。

循环肿瘤细胞（CTCs）的捕获技术
CTCs作为肿瘤转移的“种子”，其检测面临低丰度挑战（1 CTC/10⁶-10⁸白细胞）。基于物理特性的微滤技术（如8 μm孔径的MetaCell kit）可富集骨肉瘤和横纹肌肉瘤的CTCs，但存在白细胞污染风险。免疫磁分选技术针对尤文肉瘤的CD99标记或肉瘤通用标记细胞表面波形蛋白（CSV）提高了特异性。例如，尤文肉瘤中EWS-FLI1融合转录本的CTC检测可预测微小残留病（MRD），而骨肉瘤CTC的碱性磷酸酶（ALP）表达与疾病进展相关。

循环肿瘤DNA（ctDNA）的动态监测
ctDNA携带肿瘤特异性突变，如骨肉瘤的TP53/RB1缺失、尤文肉瘤的EWSR1-ETS融合基因。超低深度全基因组测序（ULP-WGS）显示，诊断时ctDNA拷贝数异常评分（diagCPA）是骨肉瘤预后的独立因素。尤文肉瘤患者化疗后ctDNA下降≥0.5%提示疗效良好，而持续阳性者复发风险显著增加。此外，软骨肉瘤的IDH1/2突变和滑膜肉瘤的SS18-SSX融合基因也可通过ddPCR或NGS精准检测。

循环microRNA的分子标志物
miRNA-25-3p在骨肉瘤血清中高表达且与不良预后相关，而miRNA-34a低表达提示晚期疾病。肌肉特异性miR-206可作为横纹肌肉瘤的诊断标志物，神经鞘瘤患者的血清miR-801/miR-214组合则有助于区分恶性周围神经鞘瘤（MPNST）与神经纤维瘤病1型（NF1）。

细胞外囊泡（EVs）的诊疗潜力
滑膜肉瘤EVs表面标志物MCT1/CD9与肿瘤负荷相关，而尤文肉瘤EVs的ENO-1表达在动物模型中随肿瘤生长升高。EVs携带的核酸和蛋白质信息为开发靶向疗法提供了新思路，例如基于EVs的PD-L1检测可评估免疫治疗响应。

未来方向
液体活检的临床转化仍需解决技术灵敏度、肿瘤异质性及标准化问题。结合多组学分析和人工智能，液体活检有望成为肉瘤诊疗的“液体雷达”，实现从MRD监测到治疗策略优化的全程管理。