荧光激活颗粒分选技术(FAPS):实现生物 condensates 纯化的突破性方法

【字体: 时间:2025年07月19日 来源:Nature Protocols 13.1

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  来自国际前沿团队的研究人员针对细胞 condensates 纯度低、缺乏特异性标记蛋白等难题,开发了基于流式分选的荧光激活颗粒分选技术(FAPS)。该技术通过荧光标记特异性识别并纯化P-bodies等 condensates,首次实现了对其核酸和蛋白质组分的系统性表征,为研究亚细胞区室化机制提供了全新工具。

  生物 condensates 因其独特的亚细胞空间组织功能备受关注。真核细胞中,核内 condensates 包含核仁和旁斑,而胞质 condensates 则涵盖P-bodies(PBs)和应激颗粒等。研究这些 condensates 的核心挑战在于:其密度与其他细胞器相近,且缺乏特异性标记蛋白,加之单个细胞内 condensates 数量稀少,传统纯化方法难以奏效。

荧光激活颗粒分选技术(Fluorescence-activated particle sorting, FAPS)的创新性在于:通过特异性荧光标记,结合高灵敏度流式细胞分选仪,实现了 condensates 的高效识别与分离。本方案详细描述了从人源细胞系纯化PBs的全流程,包括质量控制及后续核酸/蛋白质组分分析。虽然以PBs为示范对象,该技术可拓展至多种模式生物的不同类型 condensates 研究。

技术要点包括:需具备基础细胞培养、分子生物学及流式细胞术知识;需配置高灵敏度荧光激活细胞分选仪;完整流程耗时25-30天,其中实际操作周期约15天。这项突破性技术为系统解析各类 condensates 的分子组成及其在细胞生理病理过程中的作用机制提供了强大工具。

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