单细胞解析CD34+CD90+内皮细胞通过TGF-β信号促进胆囊癌转移的机制

本研究针对胆囊癌（GBC）高转移特性，通过单细胞RNA测序技术鉴定出CD34+CD90+内皮细胞亚群（SAEndo2），揭示其通过TGF-β通路诱导内皮-间质转化（EndoMT）促进肿瘤转移的机制，为GBC靶向治疗提供新策略。

　　

胆囊癌（GBC）作为胆道系统最常见的恶性肿瘤，其五年生存率不足20%，主要归因于早期诊断困难和高转移倾向。尽管肿瘤微环境（TME）在癌症进展中的作用已被广泛认知，但构成GBC血管系统的内皮细胞（ECs）异质性及其功能机制仍是未解之谜。传统观点认为肿瘤血管仅是营养输送通道，而最新研究表明内皮细胞可通过表型转化直接参与转移过程，这种被称为内皮-间质转化（EndoMT）的现象在GBC中尚未被系统研究。

上海东方肝胆外科医院的研究团队在《npj Precision Oncology》发表的研究中，通过整合单细胞转录组测序（scRNA-seq）、多色免疫荧光和功能实验，首次绘制了GBC内皮细胞全景图谱。研究人员收集12例初治GBC患者肿瘤组织和6例慢性胆囊炎良性组织，利用10x Genomics平台完成单细胞捕获，通过t-SNE聚类鉴定出8个内皮亚群。关键发现聚焦于特异性富集于肿瘤组织的SAEndo2亚群，该群体高表达CD34和CD90（THY1），在患者中呈现纤维细胞样形态且与肝转移显著相关。

研究采用三大关键技术：1）基于12例GBC和6例良性组织的单细胞转录组测序构建内皮细胞图谱；2）通过流式分选和免疫荧光验证CD34⁺CD90⁺群体临床意义；3）建立原位肝转移小鼠模型结合TGF-β抑制剂（ITD/PFD）干预实验。

单细胞景观揭示GBC特异性内皮亚群
scRNA-seq将8,897个内皮细胞分为8个亚群，包括典型动脉内皮细胞（AECs）、静脉内皮细胞（VECs）和3个瘢痕相关内皮亚群（SAEndo1-3）。SAEndo2特异性高表达ESM1和THY1（CD90），在肿瘤组织中占比达10.4%，而良性组织中几乎缺失（图1G-H）。生存分析显示SAEndo2高组患者中位生存期缩短40%（P=0.01），肝转移发生率提高3倍。

CD34⁺CD90⁺ECs的EndoMT特性
分离的原代细胞显示：CD34⁺CD90⁺群体呈现纺锤形形态（图4C），高表达间质标志物FN1、α-SMA和转录因子TWIST（图4D）。免疫荧光证实其磷酸化SMAD2/3水平升高（图S3A），提示TGF-β通路激活。共培养实验表明该群体使GBC-SD细胞迁移能力提升2.1倍（P<0.001），而MMP9抗体可逆转此效应（图4F-H）。

TGF-β介导的促转移机制
细胞互作分析揭示SAEndo2与肿瘤细胞通过TGF-β信号形成强相互作用（图3F）。小鼠模型中，CD34⁺CD90⁺组肝脏荧光强度较对照组高3.8倍（图5B），肿瘤组织出现典型囊性结构（图5D），交界区MMP9⁺细胞增加2.4倍（P<0.01）。

该研究不仅首次阐明CD34⁺CD90⁺内皮亚群作为GBC转移的驱动因素，更创新性提出"血管内皮-转移轴"概念。临床转化方面，CD90⁺内皮细胞比例可作为TGF-β靶向治疗的疗效预测标志物，而双靶向CD90/TGF-β策略可能突破现有抗血管治疗瓶颈。值得注意的是，研究在肝癌单细胞数据中也发现类似群体（图6G），暗示该机制可能普遍存在于上皮源性恶性肿瘤。这些发现为理解肿瘤血管异质性提供了新视角，也为GBC精准治疗开辟了新途径。