糖皮质激素受体(GR)体外转活化试验的实验室间验证研究：为内分泌干扰物筛查提供标准化工具

本研究针对环境化学品的GR通路干扰风险，开发了基于Hela细胞（MMTV-Luciferase报告基因系统）的体外转活化试验(TA)，通过四实验室"盲法"环试验验证34种化合物，结果显示实验室间分类一致性达97%、实验室内重复性达99.6%，该方法有望成为OECD测试指南，为内分泌干扰物(EDs)分级评估体系提供关键工具。

　　

在环境污染与健康风险日益受到关注的今天，化学物质对内分泌系统的干扰效应成为重大科学议题。糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor, GR)作为类固醇受体(Steroid Receptors, SRs)家族核心成员，调控着发育、代谢和免疫等关键生理过程。然而，现有监管体系缺乏标准化的GR干扰物检测方法，导致双酚类、农药、阻燃剂等常见化学品难以系统评估。更严峻的是，已有6个不良结局通路(Adverse Outcome Pathways, AOPs)明确将GR异常激活与精子质量下降、肝脏脂肪变性等疾病关联，其中4个通路以GR激活为分子起始事件(Molecular Initiating Event, MIE)。

法国国家健康与医学研究院(INSERM)联合三家机构开展的这项创新研究，开发了基于HMLN-hGR细胞系的GR转活化(Transactivation, TA)检测平台。该细胞系通过稳定转染人GR基因(pSG5-hGR-puromycin)和MMTV-Luciferase报告基因构建，能特异性响应地塞米松等激动剂。研究团队通过两阶段验证：先由三个实验室完成方法转移测试，再对34种"盲样"化合物开展环试验。令人振奋的是，《Toxicology in Vitro》发表的成果显示，所有实验室对97%受试物的活性分类完全一致，实验室内数据重复性高达99.6%，仅1例/272平行样本出现偏差。更关键的是，所有已知GR调节剂均被准确识别，证实该方法具有卓越的稳定性和可转移性。

研究主要采用三大关键技术：1）基于报告基因的转活化检测系统（MMTV启动子驱动荧光素酶表达）；2）稳定转染细胞系构建（HeLa细胞双抗性筛选）；3）多中心"盲法"验证设计（含阳性对照地塞米松梯度测试）。这些方法确保了对GR激动剂/拮抗剂的高通量、高特异性筛查能力。

【主要发现】

1. 方法转移验证

• 四实验室对标准品地塞米松的EC₅₀检测差异<3倍，Z'因子均>0.5，证实操作标准化成功

1. 化合物测试结果

• 强GR激动剂（如皮质醇、氟替卡松）在所有实验室均显示典型S型剂量曲线
• 争议性化合物双酚A在10μM时引发微弱激活（<20%最大响应），被统一判定为阴性

1. 数据质量评估

• 板间变异系数(CV)控制在15%以内
• 阴性对照DMSO的信号波动范围<5%

【研究意义】
该成果首次建立GR干扰作用的标准化评估框架，其三大突破尤为突出：首先，填补OECD现有测试指南（仅含ER/AR检测）的关键空白；其次，多中心验证数据为该方法升格为国际标准提供实证基础；最后，模块化设计使其可整合入现有EDs评估组合策略。正如作者Andrea Rivero-Arze强调的，该方法不仅能用于化学品开发阶段的早期筛选，更将为环境样本的GR干扰效应监测提供可靠工具。随着GR相关AOP网络的完善，这项研究为揭示化学品-GR互作与疾病关联的"黑箱"提供了关键解码器。