透明质酸载体单次注射FSH对意大利地中海水牛卵母细胞发育能力及激素水平的影响

为解决水牛卵巢刺激方案操作繁琐、动物应激大等问题，研究人员开展了一项创新性研究，比较透明质酸(HA)载体单次注射FSH(FSH-HA)与传统六次注射方案(FSH-6)对意大利地中海水牛(IMB)卵泡发育、卵母细胞质量及应激水平的影响。结果表明FSH-HA方案显著增加中等卵泡比例(3.4±2.7 vs 2.0±2.3)和卵裂胚数量(3.3±0.4 vs 2.4±0.4)，同时降低皮质醇水平趋势(P<0.10)，为简化水牛OPU-IVEP(卵母细胞采集-体外胚胎生产)程序提供了新思路。

　　

在畜牧业生产中，意大利地中海水牛(IMB)因其卓越的产奶性能成为重要的经济畜种。然而，与奶牛相比，水牛繁殖效率低下始终是制约产业发展的瓶颈——其原始卵泡储备少、发情周期中发育卵泡数量有限，导致通过常规超数排卵(MOET)获取胚胎的难度极大。目前，卵母细胞采集(OPU)结合体外胚胎生产(IVEP)技术成为水牛遗传改良的核心手段，但现有激素刺激方案需要连续6次注射卵泡刺激素(FSH)，不仅操作繁琐增加养殖成本，频繁的动物保定更可能通过应激反应影响卵母细胞质量。

针对这一行业痛点，那不勒斯费德里科二世大学的研究团队在《Theriogenology》发表了一项突破性研究。他们创新性地采用1%透明质酸(HA)作为FSH缓释载体，通过单次肌注替代传统六次注射方案，系统评估了两种方案对卵泡发育动态、卵母细胞发育能力及动物应激水平的影响。研究采用交叉实验设计，通过超声监测、体外胚胎培养和放射免疫分析等技术，首次揭示了HA载体在水牛生殖调控中的应用潜力。

关键技术方法
研究设置两个实验：实验1采用24头经产IMB进行交叉对照，比较FSH-HA与FSH-6方案的卵泡发育、胚胎产出及皮质醇变化；实验2通过12头IMB监测不同方案下血浆FSH动态。采用超声测量卵泡直径分级（小<5mm，中5-9mm，大≥9mm），体外培养评估胚胎发育，RIA法检测皮质醇，并首次验证牛FSH ELISA试剂盒在水牛的应用。

主要研究结果
3.1. FSH ELISA试剂盒验证
尽管回收率(124.9±20.2%)和批间变异(15.1%)稍高，但平行性测试显示标准曲线与血浆稀释曲线高度相关(r=0.99)，证实该方法可用于水牛FSH检测。

3.2. 实验1
FSH-HA组中等卵泡比例显著高于FSH-6组(3.4±2.7 vs 2.0±2.3，P<0.05)，且优质卵裂胚数量更多(3.3±0.4 vs 2.4±0.4)。值得注意的是，虽然总胚胎产量无差异(30.1±7.2% vs 29.2±4.5%)，但FSH-HA组在OPU前皮质醇水平有降低趋势(P<0.10)，提示动物应激减轻。

3.3. 实验2
FSH动态分析显示，HA载体使血浆FSH浓度在给药后30-72小时维持高位，峰值出现在30小时(P<0.01)，而FSH-6组在72小时出现浓度低谷。曲线下面积(AUC)分析表明，FSH-HA(0.892)与FSH-6(0.898)均显著高于对照组(0.494)。

研究意义与展望
该研究首次证实HA作为FSH载体在水牛生殖应用中的可行性，其缓释特性不仅简化了操作流程，更通过维持稳定的FSH浓度改善了卵泡发育同步性。特别重要的是，减少注射次数带来的应激水平降低，可能通过减少糖皮质激素对下丘脑-垂体-性腺轴的抑制，间接提升繁殖效率。研究人员指出，未来需进一步优化OPU时机（建议在FSH-HA给药后72-78小时进行），并探索HA浓度与FSH剂量的最佳配比。这项成果为发展"动物友好型"繁殖技术提供了重要范式，对推动水牛遗传资源保护和产业升级具有双重价值。