槲皮素通过抑制角膜上皮细胞中HSV-1附着及激活Nrf2通路延缓单纯疱疹病毒性角膜炎进展

为解决临床抗HSV-1药物耐药性及潜伏感染难题，中山眼科中心团队开展槲皮素（Quercetin）抗单纯疱疹病毒1型（HSV-1）机制研究。通过体外实验证实30 μmol/L槲皮素通过阻断病毒附着及上调核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制HSV-1复制，动物模型显示100 μmol/L槲皮素滴眼液可降低角膜和泪液病毒载量，延缓单纯疱疹病毒性角膜炎（HSK）进展。该研究为天然化合物治疗病毒性角膜炎提供新策略，发表于《Virologica Sinica》。

　　

单纯疱疹病毒1型（HSV-1）感染引发的角膜炎（HSK）是全球角膜盲的首要病因，约66.6%的50岁以下人群携带该病毒。现有疗法如阿昔洛韦（Acyclovir）虽能抑制病毒DNA聚合酶，但面临耐药株涌现和无法清除潜伏感染的困境。更棘手的是，病毒可长期潜伏于三叉神经节，在应激或发热时复发。面对这一临床挑战，中山眼科中心的研究团队将目光投向天然化合物槲皮素——这种存在于鱼腥草等植物中的黄酮类物质，此前已被发现具有广谱抗病毒活性，但其抗HSV-1的具体机制及治疗HSK的潜力尚未阐明。

研究人员在《Virologica Sinica》发表的研究中，采用多学科技术手段系统评估槲皮素的抗病毒效应。通过CCK-8检测确定槲皮素对人角膜上皮细胞（HCECs）的安全浓度范围，利用HSV-1 F株和H129 GFP标记株进行不同给药时序实验，结合qRT-PCR和Western blotting分析病毒基因表达。采用AutoDock Vina模拟槲皮素与HSV-1受体nectin-1的分子对接，通过RNA测序筛选关键通路，并建立BALB/c小鼠HSK模型验证治疗效果。

槲皮素抑制HCECs中HSV-1复制的时效与机制
实验显示30 μmol/L槲皮素在预处理、共孵育和后处理三种时序中均显著降低VP16表达，且通过抗附着实验证实其能阻断HSV-1与宿主细胞结合，分子对接揭示槲皮素与nectin-1具有-6.9 kcal/mol的高结合亲和力。值得注意的是，该浓度槲皮素对HSV-1 H129 GFP株的抑制效果与10 μmol/L阿昔洛韦相当。

剂量依赖性抗病毒效应
浓度梯度实验表明，槲皮素对HSV-1复制呈剂量依赖性抑制，30 μmol/L时病毒滴度降低至17.09%。qRT-PCR检测发现槲皮素可同时抑制HSV-1立即早期基因（α4）、早期基因（UL29）和晚期基因（US6、UL48）的转录，Western blotting进一步证实其对病毒蛋白ICP4和gD的抑制作用。

Nrf2通路的关键作用
RNA测序分析发现槲皮素处理组中11,660个基因表达发生改变，氧化应激响应通路显著富集。其中核因子E2相关因子2（Nrf2）表达呈剂量依赖性上调，siRNA敲低Nrf2后，槲皮素对ICP4的抑制率下降约40%，证实Nrf2是其抗病毒效应的部分作用靶点。

动物模型验证治疗效果
在体内实验中，100 μmol/L槲皮素滴眼液使小鼠角膜病变评分降低2.3倍，泪液病毒载量减少10² PFU/mL。组织学显示其能维持角膜上皮完整性，更重要的是显著降低了三叉神经节中VP16表达，提示可能干扰病毒神经传播。

这项研究首次阐明槲皮素通过双重机制抗HSV-1：直接竞争性结合nectin-1阻断病毒附着，同时激活Nrf2通路抑制细胞内病毒复制。相较于传统核苷类似物，槲皮素对病毒生命周期的多环节干预为其克服耐药性提供可能。研究团队特别指出，槲皮素滴眼液在角膜表面的良好耐受性（70 μmol/L以下无细胞毒性）与其抗氧化特性协同，为HSK治疗提供了兼具抗病毒和角膜保护功能的候选药物。未来需进一步探索槲皮素对潜伏感染的影响及其与Nrf2通路的精确调控关系，为临床转化奠定基础。