枯草芽孢杆菌表达系统高效制备具有溶血活性的金黄色葡萄球菌α-毒素（Hla）及其应用研究

来自国际团队的研究人员针对金黄色葡萄球菌α-毒素（Hla）传统制备方法的局限性，创新性地采用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）表达系统，通过构建含Pgrac212启动子的pHT载体，成功实现Hla-Strep-tag II融合蛋白的分泌表达。经Strep-Tactin柱一步纯化获得具有天然溶血活性的HlaWT，为病原机制研究、诊断试剂开发及类毒素疫苗制备提供了安全高效的平台技术。

　　

这项突破性研究展示了如何利用革兰氏阳性模式菌株——枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为"细胞工厂"，高效制备具有完全生物活性的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)α-毒素(Alpha-Toxin, Hla)。研究人员巧妙设计表达载体：将hla基因与Strep-tag II标签融合，置于强效的IPTG诱导型P_grac212启动子调控下，构建出专用于枯草芽孢杆菌的pHT重组载体。

诱导表达后，分泌至胞外的Hla蛋白通过SDS-PAGE电泳和抗Hla多克隆抗体Western blot验证。利用Strep-Tactin亲和层析柱可实现一步纯化，ELISA检测证实纯化产物具有优异免疫反应性。最具说服力的是，采用兔红细胞进行的溶血实验显示，该制备方法得到的HlaWT完全保留膜穿孔活性。

该技术突破意义重大：首先，枯草芽孢杆菌作为公认安全(GRAS)宿主，彻底规避传统大肠杆菌系统内毒素污染风险；其次，分泌表达特性大幅简化下游纯化工艺；更重要的是，为研究Hla在金黄色葡萄球菌致病机制中的作用提供了标准化工具，同时为诊断试剂开发、免疫学研究、药物筛选平台构建以及类毒素疫苗制备开辟了新途径。