VITEK MITUBE联合MALDI-TOF质谱技术实现血流感染中革兰阴性菌直接快速鉴定的多中心性能评估

【编辑推荐】本研究首次评估VITEK MITUBE装置联合MALDI-TOF MS（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）直接从阳性血培养液中鉴定革兰阴性菌的性能。通过125例前瞻性临床样本和217例人工模拟样本验证，该系统对10种常见革兰阴性菌的鉴定准确率达95%，仅1例普罗维登斯菌误检为粪肠球菌。该技术为血流感染病原体快速鉴定提供了无需传代培养的IVDR（欧洲体外诊断法规）认证解决方案。

　　

ABSTRACT
研究团队通过多中心临床试验评估了VITEK MITUBE装置与MALDI-TOF MS联用直接从阳性血培养液中鉴定革兰阴性菌的性能。该系统采用独特的密度缓冲层设计，通过离心分离微生物后直接进行质谱检测，在欧洲获得IVDR CE认证。测试涵盖大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等10个菌种，临床样本鉴定准确率达98.4%，人工模拟样本中仅普罗维登斯 vulgaris存在41.9%的漏检率。

IMPORTANCE
该技术填补了临床微生物领域对血流感染快速诊断的需求，相比传统方法节省24-48小时培养时间。值得注意的是，系统采用VITEK MS KB 3.3数据库时，对肺炎克雷伯菌的鉴定成功率达93%，且所有测试菌株均未出现交叉污染导致的假阳性结果。

INTRODUCTION
当前血流感染快速诊断技术包括Accelerate Arc、Bruker SepsiTyper等系统。VITEK MITUBE的创新性在于其一体化设计——通过特殊离心管分离微生物后，可直接将菌悬液点靶进行MALDI-TOF MS检测。研究特别强调，该系统操作全程仅需18分钟离心和3秒涡旋，显著低于同类产品的处理时长。

MATERIALS AND METHODS
研究采用BACT/ALERT 3D/VIRTUO培养系统，纳入标准包括：单菌生长、革兰阴性杆菌形态、检测时限≤16小时。关键步骤包括：2.5mL血培养液与裂解缓冲液混合后，通过密度梯度离心（3,000×g 10分钟）分离微生物，最终使用VITEK DENSICHEK确认菌悬液浓度≥0.5麦氏单位。质谱检测采用双靶点重复检测策略，首次鉴定失败时采用洗涤重悬流程。

RESULTS
前瞻性临床样本中，69株大肠杆菌全部正确鉴定，29株肺炎克雷伯菌中有2株未获鉴定。人工模拟样本显示，普罗维登斯 vulgaris的鉴定成功率仅58.1%，显著低于其他菌种。值得注意的是，1株奇异变形杆菌被误判为粪肠球菌，经测序确认属数据库匹配异常。数据统计显示，96.8%样本首次点靶即获成功鉴定，重复检测可使总鉴定率提升至98.4%。

DISCUSSION
相比分子检测方法，该技术优势在于：①无需额外设备，兼容现有VITEK MS系统；②成本降低约60%；③检测通量高。局限性在于目前仅认证10种革兰阴性菌，且对变形杆菌属检测性能有待优化。研究者预测，随着快速药敏检测系统的发展，此类直接检测技术将与分子诊断形成互补格局。

ACKNOWLEDGMENTS
研究获得美国3个临床中心支持，特别致谢参与样本收集的Marion Tuohy等研究人员。资金部分来源于Yen-Lieberman临床微生物研究基金。研究数据已重新分析确保符合最新KB 3.3数据库标准，排除早期KB 3.2版本的4例不一致结果。