高效选择性培养基的开发及其在鸡副鸡禽杆菌分离中的应用研究

这篇研究开发了两种新型选择性培养基MSNV（含万古霉素）和MSCV（含结晶紫），显著提高了鸡传染性鼻炎病原体副鸡禽杆菌（AvP）的分离效率（分别达59.4%和46.9%），解决了传统方法依赖"护士细菌"（nurse bacteria）且易受呼吸道共生菌污染的难题。培养基以Mueller Hinton为基础，添加胎牛血清（FBS）和NAD+（25 μg/mL），可同步分离非致病性AvP变异株（npAvP），为疫苗研发和耐药性测试提供关键技术支撑。

　　

引言

鸡传染性鼻炎（IC）是由副鸡禽杆菌（AvP）引发的上呼吸道疾病，导致蛋鸡产蛋量骤降。传统分离方法依赖提供NAD因子的"护士细菌"（如Staphylococcus hyicus），且易受呼吸道共生菌干扰。2018年美国中西部突发疫情及2023年俄亥俄州流行病暴发，凸显改进诊断技术的紧迫性。

材料与方法

研究测试了四种基础培养基（Casman、Mueller Hinton/MHA、Columbia、TSA）结合不同生长因子（马血、胎牛血清/FBS、NAD⁺）。优化后的MSN培养基（MHA+5% FBS+25 μg/mL NAD⁺）通过添加万古霉素（50 μg/mL）或结晶紫（4 μg/mL）制成选择性培养基MSNV/MSCV。从32个临床病例（400份样本）中平行比较新培养基与爱荷华州立大学兽医诊断实验室（ISU-VDL）标准方法（含护士细菌的巧克力琼脂）的分离效果。

结果

培养基优化：MSN培养基48小时菌落数达1×10⁸ CFU/mL，显著优于TSA（8.25×10⁷ CFU/mL）。MSN肉汤培养显示，AvP在24小时仍保持高活性，而TSA肉汤中菌量快速衰减。
临床分离：对207份RT-PCR阳性样本，MSNV/MSCV联合分离率达63.3%（131株），远超传统方法37.7%（78株）。MSNV对革兰阳性菌抑制更强，而MSCV使AvP菌落呈淡紫色便于鉴别。
特殊突破：首次从153份无症状样本中分离出4株非致病性AvP（npAvP），其基因组特征显示缺乏荚膜合成能力。

讨论

MSNV/MSCV通过双重机制突破技术瓶颈：① 消除护士细菌依赖，直接提供NAD⁺；② 抑制呼吸道常见共生菌（如Lactobacillus salivarius）。值得注意的是，该培养基对Pasteurellaceae科其他病原体（如Pasteurella multocida）同样有效，但Glaesserella parasuis仅耐受MSCV。研究为IC诊断提供"两天出结果"的快速方案，并支持疫苗菌株的大规模培养。

结论

两种新型选择性培养基将AvP分离效率提升68%，同时降低背景菌污染率。该技术不仅助力流行病学研究，还为开发针对npAvP的标记疫苗提供菌种资源，对控制近年暴发的IC疫情具有重要实践价值。