基于RT-RPA/CRISPR-Cas12a系统的马雅罗病毒可视化终点检测技术开发与应用

为解决热带地区马雅罗病毒(MAYV)因症状相似性和蚊媒共感染导致的漏诊问题，研究人员开发了整合逆转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)与CRISPR/Cas12a系统的检测技术。该体系针对nsP1基因保守区设计引物，在40℃条件下20分钟完成扩增，结合CRISPR检测使灵敏度达103拷贝/反应，35分钟即可获得可视化结果，为资源有限地区提供了新型分子诊断工具。

　　

在热带传染病防控领域，一种被忽视的虫媒病毒——马雅罗病毒(MAYV)正引发关注。这种与登革热病毒(DENV)、基孔肯雅病毒(CHIKV)症状高度相似的病原体，通过与黄热病病毒(YFV)共用埃及伊蚊等传播媒介，导致临床诊断困难。更令人担忧的是，它与委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)、奥罗普切病毒共同被列为潜在流行病威胁。

为突破诊断瓶颈，研究者创新性地将逆转录重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA)与基因编辑神器CRISPR/Cas12a联姻。通过精准锁定MAYV非结构蛋白1(nsP1)基因的保守序列，优化镁离子浓度等关键参数，建立40℃恒温反应体系。实验数据显示，该方案仅需20分钟即可完成核酸扩增，检测限达10⁵病毒拷贝，且与YFV、CHIKV无交叉反应。

当引入CRISPR/Cas12a进行终点检测时，系统灵敏度提升100倍至10³拷贝。整个流程在统一温度平台完成，从样本到结果仅35分钟，比传统PCR提速4-8倍。这种"恒温扩增+基因剪刀"的组合拳，不仅解决了偏远地区精密仪器的依赖问题，其可视化检测特性更使其成为现场快速诊断(POC)的理想选择。

这项发表于前沿病原体检测技术的研究，为热带病防控提供了"快准稳"的解决方案。其模块化设计思路更为其他新发传染病的诊断技术开发提供了重要范式。